RELMβ在COPD相關(guān)肺動脈高壓患者發(fā)病中作用及機制研究.pdf

1、目的：研究COPD相關(guān)肺動脈高壓（pulmonary hypertension，PH）患者肺血管重塑病理過程中，抵抗素樣分子β（resistin-like moleculeβ,RELMβ）及其介導的信號通路PI3K／Akt／mTOR在肺小動脈血管壁的表達情況，明確上述蛋白在肺血管重塑過程中的作用。通過檢測COPD相關(guān)PH患者血漿中RELMβ、HIF-1a蛋白表達水平探討其與肺動脈壓力的相關(guān)性，從而為研究COPD相關(guān)PH提供新的理論依據(jù)。

2、
　　方法：實驗共分為兩個部分。
　　第一部分收集因肺鱗癌行肺葉切除術(shù)患者的肺組織30例，通過血氣分析、肺功能、多普勒超聲心動圖將其分為非COPD非PH組（對照組）、COPD非PH組（COPD組）、COPD相關(guān)PH組（PH組）。觀察各組肺血管重塑情況，免疫組織化學染色法（IHC）檢測RELMβ蛋白在肺組織的表達部位及水平，免疫蛋白印跡（Western blot，WB）檢測RELMβ、PI3K、Akt、mTOR蛋白在患者肺小動

3、脈血管壁上的表達情況，并探討上述蛋白在肺血管重塑過程中的作用。
　　第二部分將因 COPD急性加重而入院治療的80例患者通過血氣分析、肺功能、多普勒超聲心動圖將其分為COPD相關(guān)PH組（PH組）、COPD非PH組（COPD組），并在體檢科隨機抽取行上述檢查的健康志愿者40例為對照組，采集各觀察組患者靜脈血5ml，通過離心機分離出血漿，用ELISA法檢測各組患者血漿中Relmβ、HIF-1a蛋白表達水平并探討其與肺動脈壓力的相關(guān)性。

4、
　　結(jié)果：
　　1、顯微鏡下觀察各組肺血管重塑
　　（1）對照組顯微鏡下可見肺泡結(jié)構(gòu)清晰，肺泡間隔完整，肺小動脈管壁較薄，血管腔未見狹窄。
　?。?）COPD組較對照組相比，肺泡壁斷裂、融合，可見肺大泡形成，肺泡結(jié)構(gòu)破壞明顯，肺小動脈血管壁增厚，血管腔狹窄明顯。COPD組肺小動脈管壁厚度占外徑的百分比（WT％）、肺小動脈管壁面積與血管總面積的比值（WA%）均高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。而肺小動

5、脈管腔面積與管總面積的比值（LA%）低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　?。?）PH組顯微鏡下可見肺大泡形成，其肺小動脈血管中膜層顯著增厚，血管腔明顯狹窄，該組 WT%、WA%、LA%較 COPD組比較，差異均存在顯著統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　2、免疫組織化學檢測各組肺小動脈血管壁RELMβ表達
　　免疫組織化學染色法結(jié)果顯示：COPD組與對照組相比，RELMβ表達明顯增強，差異具有統(tǒng)計學意義（P

6、<0.05）；PH組則呈強陽性表達，與COPD組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　3、Western blot檢測各組患者肺組織內(nèi)RELMβ、PI3K/Akt/mTOR信號通路蛋白表達
　　Western blot結(jié)果顯示：Relmβ在COPD組表達量顯著高于對照組，結(jié)果具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；PH組Relmβ蛋白表達量高于COPD
　　組，結(jié)果有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；p-PI3K在COPD組表

7、達量顯著高于對照組，結(jié)果具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；p-PI3K在PH組表達量顯著高于COPD組，結(jié)果具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；p-Akt308在COPD組表達量明顯高于對照組，結(jié)果具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；Akt308在PH組表達量明顯高于COPD組，結(jié)果具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；p-Akt473在 COPD組表達量明顯高于對照組，結(jié)果具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；p-Akt473在PH組表達量明顯高于COPD

8、組，結(jié)果具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；p-mTOR在COPD組表達量明顯高于對照組，結(jié)果具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；p-mTOR在PH組表達量明顯高于COPD組，結(jié)果具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　直線相關(guān)分析顯示，患者肺組織內(nèi)Relmβ蛋白與WT%、WA%、PASP呈正相關(guān)，與LA%、動脈血氧分壓(PaO2)呈負相關(guān)。
　　4、ELISA檢測各組患者血漿中Relmβ、HIF-1a表達
　　COPD組患者血

9、漿中Relmβ表達量與對照組相比，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；PH組患者血漿中Relmβ表達量與COPD組相比，具有顯著統(tǒng)計學差異（P<0.05）；COPD組患者血漿中HIF-1a表達量與對照組相比，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；COPD組患者血漿中HIF-1a表達量與PH組相比，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　直線相關(guān)分析顯示，患者血漿中RELMβ蛋白表達與PASP、HIF-1a呈正相關(guān)，與PaO2呈負相