外源性bFGF對(duì)壓瘡深部組織損傷肌組織的修復(fù)作用及機(jī)制的探討.pdf

1、壓瘡是臨床常見(jiàn)的嚴(yán)重并發(fā)癥，其中惡性壓瘡是壓瘡分類中最為嚴(yán)重的類型。臨床表現(xiàn)為受壓局部深部組織損傷，皮膚表面完整而皮下組織損傷嚴(yán)重，具有隱匿性、難愈性等特點(diǎn)。因此，早期促進(jìn)深部組織損傷修復(fù)是壓瘡防治的重點(diǎn)。堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)作為創(chuàng)傷修復(fù)的重要生長(zhǎng)因子的研究已較成熟，本研究試圖通過(guò)壓瘡深部組織損傷動(dòng)物模型觀察外源性bFGF對(duì)其深部組織損傷的修復(fù)作用，初步探討促肌肉修復(fù)的可能機(jī)制，為臨床壓瘡的防治提供科學(xué)依據(jù)。
　　目

2、的：
　　通過(guò)觀察外源性堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)對(duì)大鼠壓瘡深部組織損傷(DTI)后的肌肉修復(fù)的作用，并探討相關(guān)機(jī)制，為其在臨床隱匿性壓瘡深部組織損傷修復(fù)中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　采用壓瘡深部組織損傷(DTI)大鼠模型，將48只雄性SD大鼠隨機(jī)分為6組(n=8)，即正常對(duì)照組，損傷對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組(4d、7d、14d、21d)。損傷對(duì)照組即造模完成后的第0天。實(shí)驗(yàn)組在大鼠造模成功后分別于左側(cè)局部皮下

3、肌膜外隔天注射rhbFGF（10ug/0.1ml），右側(cè)注射等體積的生理鹽水作為對(duì)照，于損傷后的第4d，7d，14d，21d對(duì)受壓組織中心進(jìn)行取材，采集標(biāo)本后給予安樂(lè)死。肉眼觀察相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)受壓部位創(chuàng)面愈合情況并于各時(shí)間點(diǎn)對(duì)其創(chuàng)面進(jìn)行拍照評(píng)估。HE病理染色觀察骨骼肌組織形態(tài)學(xué)變化。Masson染色法分析肌肉組織纖維化情況。運(yùn)用SABC免疫組織化學(xué)法于光鏡下觀察CD31、PCNA的表達(dá)變化。免疫熒光檢測(cè)不同修復(fù)時(shí)間點(diǎn)生肌調(diào)節(jié)因子肌生成素(m

4、yogenin)及CD31蛋白表達(dá)情況。Western blotting檢測(cè)局部肌組織肌球蛋白重鏈(MyHC)及通路相關(guān)蛋白Akt，mTOR的磷酸化水平在不同時(shí)間點(diǎn)的動(dòng)態(tài)變化。
　　結(jié)果：
　　1.創(chuàng)面愈合情況:造模結(jié)束后，bFGF組和NS組受壓創(chuàng)面無(wú)明顯區(qū)別，之后隨著修復(fù)時(shí)間的延長(zhǎng)，創(chuàng)面明顯小于NS組(P＜0.05)。
　　2.形態(tài)學(xué)觀察:HE結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組在各觀察時(shí)間點(diǎn)，左側(cè)損傷處給藥組骨骼肌的修復(fù)情況均優(yōu)于右側(cè)對(duì)

5、照組，肌細(xì)胞腫脹，炎癥浸潤(rùn)，結(jié)構(gòu)紊亂等病理?yè)p傷現(xiàn)象均較右側(cè)減輕，肌細(xì)胞增殖數(shù)目增多。
　　3.Masson染色觀察顯示造模完成后，肌纖維排列紊亂、疏松，間隙較大。根據(jù)修復(fù)時(shí)間的不同，各組局部受壓肌組織出現(xiàn)不同程度的病理纖維化改變。同時(shí)間點(diǎn)，bFGF組與NS組相比，肌組織病理纖維化生成面積減少。
　　4.免疫組化結(jié)果顯示:PCNA呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，光鏡下各組于相應(yīng)天數(shù)的NS對(duì)照組相比，各bFGF給藥組單位面積內(nèi)蛋白表達(dá)陽(yáng)

6、性的顆粒數(shù)量均多于對(duì)照組（P＜0.05），bFGF組在第7d達(dá)到高峰，14d組表達(dá)開(kāi)始下降，21d組表達(dá)明顯減少;損傷對(duì)照組無(wú)CD31表達(dá)，與各組內(nèi)對(duì)照組相比，7d組、14d組，bFGF給藥后均可見(jiàn)CD31陽(yáng)性顆粒且數(shù)目較NS對(duì)照組多(P＜0.05)?；謴?fù)后期的第21d新生血管較少。
　　5.通過(guò)免疫熒光雙標(biāo)方法檢測(cè)CD31及myogenin蛋白。壓瘡組織中CD31陽(yáng)性顆粒主要分布在新生血管周?chē)?，同免疫組化結(jié)果一致。myogeni

7、n蛋白主要表達(dá)在細(xì)胞核內(nèi)，單位面積內(nèi)的陽(yáng)性顆粒數(shù)分析顯示bFGF組7d及14d myogenin蛋白表達(dá)達(dá)到高峰，與NS對(duì)照組比較差異顯著（P＜0.01）。
　　6.Western blotting檢測(cè)顯示隨修復(fù)時(shí)間的延長(zhǎng)，MyHC蛋白水平逐漸增高，各時(shí)間點(diǎn)bFGF組蛋白表達(dá)均較NS組增多（P＜0.05），bFGF組21d的蛋白含量與正常對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05); Western Blot法檢測(cè)相應(yīng)肌組織myog

8、enin蛋白表達(dá)情況可得到與其免疫熒光相同的結(jié)果，bFGF干預(yù)后，成肌素含量表達(dá)逐漸增強(qiáng)，于第7d達(dá)到高峰，之后逐漸下降，而NS對(duì)照組高峰期滯后，各組結(jié)果分析同bFGF組差異顯著（P＜0.05）。
　　7.Western blotting檢測(cè)PI3K/Akt/mTOR通路相關(guān)蛋白，結(jié)果以目的蛋白p-Akt與Akt灰度比值，p-mTOR與mTOR灰度比值表示。造模完成后的Akt及mTOR磷酸化水平均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，于第7d，

9、14d，21d發(fā)生改變，bFGF組磷酸化水平均顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，尤其在第7d蛋白表達(dá)量達(dá)到高峰。
　　結(jié)論：
　　1.外源性bFGF能通過(guò)促進(jìn)修復(fù)相關(guān)細(xì)胞的增殖，改善損傷局部組織的微循環(huán)情況，從而減少深部肌組織纖維化，有效促進(jìn)DTI肌組織的修復(fù)。
　　2.bFGF可調(diào)節(jié)損傷區(qū)域成肌素的表達(dá)，促進(jìn)肌肉修復(fù)，達(dá)到改善肌肉結(jié)構(gòu)的目的。
　　3.PI3K/Akt/mTOR通路相關(guān)蛋白磷酸化表達(dá)的增強(qiáng)，說(shuō)明外