大鼠骨骼肌缺血再灌注損傷遠隔肺組織中組織間粘附分子(ICAM-1)的表達及作用機制探討.pdf

1、目的:通過觀察大鼠骨骼肌缺血再灌注損傷中遠隔肺臟組織間粘附分子的表達情況，進一步探討缺血再灌注損傷致遠隔臟器的損傷的作用機制，為臨床治療機預(yù)防提供理論依據(jù)。
　　 缺血再灌注損傷（ischemiareperfusioninjury,IRI）最先由McCord于1985年首次提出，是指各種原因造成的局部組織器官的缺血，常常使組織細胞發(fā)生缺血性損傷(ischemiainjury)，在一定條件下恢復(fù)血液再灌注后，細胞功能代謝障礙及結(jié)構(gòu)

2、破壞不但未減輕反而損傷進一步加重的現(xiàn)象。臨床常見由斷肢再植、運動損傷及創(chuàng)傷、動脈栓塞及血栓形成、應(yīng)用止血帶時間過長等引起的肢體缺血，長期以來，人們關(guān)注于盡早恢復(fù)組織血液供應(yīng)，卻并未注意到當缺血組織恢復(fù)血液供應(yīng)以后，組織損傷仍然存在且進一步加劇。在臨床工作當中，骨骼肌缺血再灌注損傷非常常見，往往引起肌肉、肢體組織細胞壞死和感覺及運動功能障礙，可導(dǎo)致殘疾，嚴重者還可對生命造成威脅。再灌注損傷除了導(dǎo)致缺血組織的二次損傷，還能通過氧自由基、炎癥

3、因子等物質(zhì)，導(dǎo)致心、肺、肝、腎等遠隔器官的繼發(fā)損傷，并因此導(dǎo)致相當高的致殘率甚至致死率，目前已成為諸如血管外科、創(chuàng)傷科、骨科、急診外科等科室在臨床工作中面臨的現(xiàn)實問題并急需解決。
　　 近年來，對于缺血再灌注損傷的發(fā)生及作用機制，眾多學者已做了大量的研究，對于機制的探討也逐漸深入，隨著研究的進一步加深，氧自由基學說、鈣超載、無復(fù)流現(xiàn)象及中性粒細胞的作用等逐漸為人們接受。同時，也發(fā)現(xiàn)眾多炎癥因子及凋亡調(diào)控基因在缺血再灌注損傷中扮演

4、重要的作用，研究層面逐漸由細胞水平向細胞器水平進展。
　　 缺血再灌注損傷不僅引起局部組織的缺血性損傷，還可通過各種炎性介質(zhì)的作用引發(fā)遠隔器官的損傷，遠隔器官的損傷主要由炎癥反應(yīng)引起，中性粒細胞在炎癥反應(yīng)中起關(guān)鍵作用。此過程需中性粒細胞聚集、活化和釋放炎性介質(zhì)，其關(guān)鍵為中性粒細胞與內(nèi)皮細胞相互黏附，這一過程由細胞間粘附分子（ICAM-1）介導(dǎo)，本實驗期望通過觀察骨骼肌缺血再灌注損傷引發(fā)的遠隔肺組織中ICAM-1的表達情況，探討骨

5、骼肌缺血再灌注損傷引發(fā)遠隔肺損傷是否與ICAM-1有關(guān)。
　　 方法:選擇健康清潔級成年SD大鼠27只，體重150-200g，隨機分成兩組:①對照組(n=14):常規(guī)麻醉7小時后處死取材;②實驗組(n=13)按照1ml/100g腹腔注射3％戊巴比妥鈉常規(guī)麻醉后，阻斷帶阻斷右后肢血流3小時，松解阻斷再灌注4小時后取材。取骨骼肌組織采用HE染色，光鏡下觀察組織形態(tài)的改變，取左肺下葉組織行HE染色，光鏡下觀察形態(tài)學改變，取右肺下葉組織

6、，石蠟切片后免疫組織化學染色，觀察ICAM-1在肺組織的表達情況;陽性細胞采用專業(yè)圖像分析軟件Image-ProPlus6.0測定平均光密度值(MeanDensity)，用統(tǒng)計學軟件spss13.0進行數(shù)據(jù)分析。統(tǒng)計學方法采用t檢驗，以P＜0.05為有顯著性差異。
　　 結(jié)果:1.骨骼肌組織HE染色光鏡下觀察對照組:骨骼肌組織形態(tài)學正常;實驗組:肌細胞腫脹明顯，細胞間隙明顯增寬，間質(zhì)血管擴張充血，部分肌纖維溶解、壞死，炎性細胞浸

7、潤明顯。2.肺組織HE染色光鏡下觀察對照組:肺泡腔較完整，肺泡壁較光滑，肺泡間隔均勻一致，肺泡結(jié)構(gòu)較好;實驗組:肺泡腔完整性差，部分肺泡塌陷，肺泡壁不光滑，可見毛細血管擴張、充血，部分白細胞附壁，肺泡間隔增寬增厚，大量白細胞聚集，肺泡腔內(nèi)可見明顯滲出及出血。3.免疫組織化學結(jié)果光鏡下觀察可見:ICAM-1主要于肺泡上皮細胞及血管內(nèi)皮細胞表達，表現(xiàn)為棕黃色顆粒，實驗組免疫陽性細胞的平均光密度值為(0.1160±0.022)對照組免疫陽性細