當(dāng)歸及其混偽品的分子鑒定研究.pdf

1、目的:用DNA條形碼trnL-F以及ropC1序列對當(dāng)歸及其混偽品進行鑒別，尋找出適合當(dāng)歸鑒別的DNA條形碼，建立其分子鑒定方法;構(gòu)建當(dāng)歸的簡單重復(fù)序列(inter-simple sequence repeat，ISSR)的多態(tài)性指紋圖譜，并建立序列特異性擴增區(qū)(sequence characterizedamplified region，SCAR)標(biāo)記技術(shù)，為當(dāng)歸的快速分子鑒定提供支持;并初步探究當(dāng)歸中成藥中SCAR標(biāo)記的適用性;

2、r>　　方法:對25份當(dāng)歸及其混偽品材料的trnL-F以及ropC1序列進行擴增、測序。對序列進行比對、分析，計算材料間的遺傳距離并構(gòu)建系統(tǒng)進化樹;通過篩選ISSR引物，找到特異性的當(dāng)歸條帶，對其測序并設(shè)計引物得到SCAR標(biāo)記;通過四種不同的DNA提取方法:CTAB法、SDS法、磁珠法及改良CTAB法對當(dāng)歸中成藥中的總DNA進行提取，并用trnL-F以及SCAR標(biāo)記對其中當(dāng)歸進行驗證;
　　結(jié)果:trnL-F以及ropC1序列對當(dāng)

3、歸及其混偽品均可成功擴增并測序，trnL-F序列能鑒別當(dāng)歸及其混偽品，數(shù)據(jù)顯示當(dāng)歸及其混偽品材料具有顯著堿基差別，在當(dāng)歸的鑒定方面具有重要的意義，而ropC1序列無法找出當(dāng)歸及其混偽品間的差異位點，對當(dāng)歸鑒別意義較弱;14條ISSR引物中，共擴增出135條條帶，多態(tài)性比例高達90.37％，其中有4條為當(dāng)歸的特異性條帶;根據(jù)ISSR引物設(shè)計的SCAR標(biāo)記對6種正品當(dāng)歸為陽性結(jié)果，對其余近緣種屬則為陰性結(jié)果;四種方法提取DNA電泳及微量紫外

4、分光光度計均未顯示有結(jié)果，但對其trnL-F及SCAR標(biāo)記進行擴增后，改良CTAB法出現(xiàn)了明顯的條帶，其余方法未見有擴增條帶;
　　結(jié)論:ropC1序列對當(dāng)歸及其混偽品間的鑒別作用不佳，而trnL-F序列能成功鑒定當(dāng)歸及其混偽品，可作為當(dāng)歸及混偽品的分子鑒定方法;開發(fā)的SCAR標(biāo)記可以成功的對當(dāng)歸及其混偽品進行鑒別，對當(dāng)歸的鑒別具有重要意義;改良CTAB法為中成藥DNA提取提供了新方法，解決了中成藥無法進行分子鑒定的瓶頸，并在SC