拉克替醇和嬰兒雙歧桿菌對便秘大鼠AQP3及ICC的影響.pdf

1、背景和目的：
　　便秘是臨床上常見一種疾病，其發(fā)病率高，病因復(fù)雜，攝食、飲水過少或攝入富含纖維素的食物較少，排便動力異常，應(yīng)用阿片類藥物等都會導(dǎo)致便秘的發(fā)生。便秘會導(dǎo)致胃腸神經(jīng)功能紊亂，也與心、腦血管疾病、肝性腦病等的發(fā)作密切相關(guān)，對人們的生活造成了很大的影響。因此探討便秘的發(fā)病機(jī)制及其治療機(jī)制具有重要意義。
　　研究表明，結(jié)腸內(nèi)水的轉(zhuǎn)運(yùn)及腸道動力在便秘的發(fā)病機(jī)制中有重要作用。AQPs是一類位于細(xì)胞膜上的蛋白，它可以調(diào)節(jié)水在

2、細(xì)胞的進(jìn)出，而AQP3在結(jié)腸水分代謝中發(fā)揮了重要作用。ICC從本質(zhì)上來說既非神經(jīng)細(xì)胞又非平滑肌細(xì)胞，它能啟動節(jié)律性電活動，產(chǎn)生節(jié)律性慢波，因此被認(rèn)為是胃腸活動的起搏細(xì)胞，它可以通過調(diào)節(jié)平滑肌的收縮節(jié)律來調(diào)節(jié)腸道運(yùn)動。但 AQP3參與胃腸道內(nèi)水的轉(zhuǎn)運(yùn)及ICC調(diào)節(jié)腸道動力的機(jī)制尚未完全闡明。
　　關(guān)于便秘的治療，臨床上常采用膨脹性、滲透性或刺激性等藥物，雖已取得了很好的療效，但也帶來了一些副作用，如腹瀉、藥物依賴、腸道菌群失調(diào)等。拉克

3、替醇能夠選擇性的促進(jìn)腸道內(nèi)有益菌數(shù)量的增長，也可產(chǎn)生有機(jī)酸，升高腸道內(nèi)滲透壓，緩解便秘。嬰兒雙歧桿菌能夠在腸道內(nèi)定植，且產(chǎn)生乳酸、醋酸等有機(jī)酸，降低腸道內(nèi)Ph值，促進(jìn)腸道蠕動，防止便秘。雖然拉克替醇和嬰兒雙岐桿菌都能改善便秘，但是其具體分子機(jī)制以及聯(lián)合治療便秘的效果尚未明確。
　　因此，本研究采用洛哌丁胺建立標(biāo)準(zhǔn)化的大鼠便秘模型，并用拉克替醇及嬰兒雙歧桿菌進(jìn)行治療，觀察它們對大鼠便秘的治療效果，并探討它們治療大鼠便秘的作用機(jī)制及其

4、對AQP3、ICC的影響，為臨床上便秘的治療提供理論依據(jù)。
　　材料與方法：
　　SD大鼠30只，隨機(jī)選取6只為對照組，其余大鼠連續(xù)5天給予洛哌丁胺(4mg/kg.d)灌胃建立便秘模型后隨機(jī)分為模型組、拉克替醇組、嬰兒雙歧桿菌組、聯(lián)合組。對照組及模型組予以生理鹽水1ml灌胃，拉克替醇組、嬰兒雙歧桿菌組、聯(lián)合組分別給予10g/kg的拉克替醇1ml、1×1010cfu/ml的嬰兒雙歧桿菌1ml、拉克替醇10g/kg+1×1010

5、cfu/ml的嬰兒雙歧桿菌1ml灌胃，連續(xù)治療7天。監(jiān)測大鼠攝食量、攝水量及體重變化情況。檢測各組大鼠糞便含水量及小腸推進(jìn)率。留取各組大鼠血清、結(jié)腸組織。Elisa法測定各組大鼠血清中SP、VIP含量的變化。Real Time-PCR檢測結(jié)腸PKA、NK-1 mRNA的表達(dá)情況；Western blot、Real Time-PCR檢測結(jié)腸AQP3、ICC蛋白和mRNA表達(dá)量的變化。
　　結(jié)果：
　　1.造模前，各組大鼠的體重

6、無統(tǒng)計學(xué)差異（p>0.05）。造模第5天，對照組大鼠體重明顯增加，余便秘模型組大鼠的體重增加不明顯，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05）。便秘模型組大鼠糞便呈顆粒狀，糞便含水率與對照組相比明顯下降（p<0.05），提示成功建立大鼠便秘模型。治療7天后，各治療組糞便含水率與模型組相比均升高（P<0.05），但與對照組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（p>0.05）。各組大鼠在治療結(jié)束后行小腸推進(jìn)率的測定，結(jié)果表明：與對照組相比，模型組小腸推進(jìn)率明顯降

7、低（P<0.05）；與模型組相比，各治療組小腸推進(jìn)率增高（P<0.05），但與對照組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　2.與對照組相比，模型組大鼠血清中SP、VIP表達(dá)量降低（P<0.05）；與模型組相比，嬰兒雙歧桿菌組血清SP、VIP表達(dá)量增高（P<0.05），拉克替醇組、聯(lián)合組血清SP、VIP表達(dá)量明顯增高（P<0.01），但與對照組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　3.與對照組相比，模型組大鼠結(jié)

8、腸中AQP3mRNA、ICC mRNA、PKA mRNA、NK1 mRNA表達(dá)量降低（P<0.05）；與模型組相比，各治療組大鼠結(jié)腸AQP3mRNA、ICC mRNA、PKA mRNA、NK1 mRNA升高（P<0.05）。
　　4.與對照組相比，模型組大鼠結(jié)腸內(nèi) AQP3、ICC的蛋白表達(dá)量明顯降低（P<0.01）；與模型組相比，嬰兒雙歧桿菌組大鼠結(jié)腸內(nèi)AQP3、ICC的蛋白表達(dá)升高（P<0.05），拉克替醇組、聯(lián)合組大鼠結(jié)腸內(nèi)

9、AQP3、ICC的蛋白表達(dá)明顯升高（P<0.01）。
　　結(jié)論
　　1.洛哌丁胺可以成功建立大鼠便秘模型，拉克替醇和嬰兒雙歧桿菌可以不同程度的改善大鼠的便秘情況，且二者聯(lián)合應(yīng)用效果更好。
　　2.拉克替醇和嬰兒雙歧桿菌可以增加大鼠血清中VIP的濃度，VIP可能與腸上皮細(xì)胞上的受體結(jié)合后激活細(xì)胞膜上腺苷酸環(huán)化酶，激活PKA，促使核轉(zhuǎn)錄因子磷酸化，最終增強(qiáng) AQP3mRNA和蛋白的表達(dá)，促進(jìn)水份向腸腔內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)，提高結(jié)腸內(nèi)糞便