益氣潤腸方對慢性傳輸型便秘大鼠結(jié)腸ICC及SCF-c-Kit信號通路影響的研究.pdf

1、慢傳輸型便秘是功能性便秘的常見類型，占慢性便秘的16％-40％。其病因不明，病理變化不明顯，治療困難，反復發(fā)作，嚴重影響患者生活質(zhì)量，并易誘發(fā)其他系統(tǒng)疾病。研究和治療該病具有重要的意義。以往的療效評價研究結(jié)果顯示，益氣潤腸方治療功能性便秘安全有效。本研究旨在通過動物實驗進一步闡釋益氣潤腸方治療STC的作用機制。
　　目的:研究益氣潤腸方對STC狀態(tài)下結(jié)腸ICC改變及SCF/c-Kit信號通路影響，進一步揭示該方治療STC的機制。<

2、br>　　方法:48只Wistar大鼠隨機分為正常對照組、模型組、芪蓉潤腸口服液組和益氣潤腸方組，每組12只。正常對照組不造模，其余各組灌胃給予復方地芬諾酯混懸液120天，誘導大鼠STC模型。造模成功后，正常對照組予正常飼料和水喂養(yǎng);模型組、芪蓉潤腸口服液組、益氣潤腸方組分別灌服等體積生理鹽水、芪蓉潤腸口服液稀釋液及益氣潤腸方湯藥，連續(xù)灌藥20d。末次給藥結(jié)束后，肉眼觀察大鼠一般情況，用代謝籠測定大鼠24小時排便粒數(shù)。而后各組大鼠均禁食

3、不禁水24 h，活性炭懸液灌胃，30min后頸椎脫臼處死，摘除幽門到直腸末端的腸道，松弛狀態(tài)下計算腸道炭末推進百分率=（碳末前端至幽門的距離/腸道全長）×100％。對每只大鼠切取結(jié)腸段區(qū)域肌層組織約1cm，分別于中性福爾馬林溶液中固定及EP管保存?zhèn)溆谩E染色，觀察大鼠結(jié)腸的組織結(jié)構(gòu)。進行免疫組化實驗，觀察結(jié)腸ICC的形態(tài)，每張切片隨機選取5個高倍視野，應(yīng)用Image-Pro Plus6.0軟件分析不同部位ICC的面積和積分光密度。實時

4、熒光定量PCR方法檢測SCF mRNA、c-kit mRNA的表達，以2-△△Ct計算目的基因的相對表達量。
　　結(jié)果:
　　1.大鼠24小時排便粒數(shù):益氣潤腸方組與模型組相比，24小時排便粒數(shù)明顯增加(P＜0.01);與芪蓉潤腸口服液組相比增加(P＜0.05);與正常對照組相比，其24小時排便粒數(shù)的均值有所增加，但經(jīng)統(tǒng)計學分析無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　2.炭末推進率:益氣潤腸方組與模型組相比，結(jié)腸炭末推進率

5、提高(P＜0.05);與芪蓉潤腸口服液組相比，有所提高，但經(jīng)統(tǒng)計學分析無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);與正常對照組相比，結(jié)腸炭末推進率有所提高，但經(jīng)統(tǒng)計學分析無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　3.結(jié)腸ICC面積及IOD值:正常對照組與模型組相比較，二者有明顯的統(tǒng)計學差異(P＜0.01)，正常對照組ICC面積和IOD明顯高于模型組。益氣潤腸方組與模型組相比較，二者有明顯的統(tǒng)計學差異(P＜0.01)，益氣潤腸方組ICC的面積和IOD增

6、加。正常對照組與益氣潤腸方組相比較，ICC的面積和IOD無明顯的統(tǒng)計學差異(P＞0.05)，但益氣潤腸方組的面積及IOD均值高于正常對照組。芪蓉潤腸口服液組與模型組比較，有明顯的統(tǒng)計學差異(P＜0.01)，前者ICC面積和IOD明顯高于后者。益氣潤腸方組與芪蓉潤腸口服液組相比較，有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，前者ICC面積和IOD高于后者。
　　4.SCF mRNA和c-kit mRNA相對表達量:與正常對照組相比，模型組SCF

7、mRNA表達量相對降低(P＜0.05)。與模型組相比，芪蓉潤腸口服液組和益氣潤腸方組的SCF mRNA表達量相對升高(P＜0.05)。雖然無統(tǒng)計學意義，但芪蓉潤腸口服液和益氣潤腸方均可使SCF mRNA表達量接近正常對照組(P＞0.05)。與正常對照組相比，模型組c-kit mRNA表達量相對降低(P＜0.05)。與模型組相比，芪蓉潤腸口服液組和益氣潤腸方組的c-kit mRNA表達量相對升高(P＜0.05)。其中益氣潤腸方對c-kit