酪氨酸激酶不可逆抑制劑(Transtinib)與脂肪間充質(zhì)干細胞臨床前研究.pdf

1、本文分為兩個部分進行探討：
　　第一部分:近年來，癌癥已經(jīng)成為嚴重影響人類健康的第一殺手，在我國每年因癌癥死亡的病例高達211萬例。而腫瘤細胞在用藥過程中產(chǎn)生的耐藥問題是腫瘤難以根治的重要原因之一。異常的蛋白激酶活性牽涉到眾多癌癥，因此，使用激酶抑制劑成為一個重要的治療手段，其中，以EGFR(epidermal growth factorreceptor, EGFR)為靶點的小分子抑制劑的研制則是抗腫瘤的熱點之一，表皮生長因子受體

2、(EGFR)是一種受體酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinase，RTK)，具有催化活性并受到嚴密的調(diào)控。EGFR及其家族成員包括HER2，HER3和HER4在調(diào)控細胞增殖，生存和轉(zhuǎn)移等活動中起到極其重要的作用。因EGFR，HER2過表達和/或突變而引起的信號傳遞系統(tǒng)異常，是許多腫瘤惡變的共同特征。同時具有EGFR或HER2變化的癌癥患者一般有著更加嚴重的病情和不良的預后。
　　在過去的幾十年內(nèi)，針對EGFR的小

3、分子靶向制劑相當成功，發(fā)展了一系列的藥物，如吉非替尼(gefitinib)，厄洛替尼(erlotinib)等，然而有激活突變的EGFR的腫瘤患者，尤其是非小細胞肺癌患者在用藥10-16個月后往往會產(chǎn)生耐藥性，而導致此耐藥性最重要的原因之一就是EGFR的790氨基酸產(chǎn)生突變(T790M)。因此研制針對此耐藥性的小分子靶向制劑成為目前非小細胞肺癌靶向治療的關(guān)鍵。以阿法替尼(afatinib)為代表的EGFR不可逆抑制劑通過藥物分子結(jié)構(gòu)中所含

4、有的親電基團可實現(xiàn)與靶蛋白之間的共價結(jié)合，提高抑制劑與靶蛋白的親和力，從而增強抗腫瘤效果，這為解決可逆抑制劑的耐藥性問題提供了新的思路。
　　本部分內(nèi)容將圍繞EGFR耐藥性問題進行研究。首先基于結(jié)構(gòu)藥物設計的原理，借助于分子對接技術(shù)，設計合成一系列喹唑啉類化合物，并對所合成和篩選的化合物進行基本的腫瘤細胞活性及移植瘤動物模型的評價。計算機輔助藥物設計結(jié)果顯示，所設計并合成的化合物不可逆抑制作用存在。體外腫瘤細胞篩選結(jié)果顯示，所篩選

5、的三個化合物均對人表皮癌細胞系A(chǔ)431（野生型，過表達）及gefitinib耐藥性的人非小細胞肺癌細胞系H1975有良好的抗增殖活性，對腫瘤細胞生長的半數(shù)抑制濃度(IC50)為34 nM到95 nM，同時在人非小細胞肺癌H1975細胞系及人表皮癌A431細胞系小鼠皮下移植瘤抑制實驗中發(fā)現(xiàn)，化合物13C在5mg/kg/day劑量下對小鼠移植瘤有著明顯的抑制作用。綜合所有結(jié)果顯示，所合成篩選的化合物是一種潛在的抑制突變型EGFR的先導化合物

6、。
　　第二部分:脂肪間充質(zhì)干細胞以其易分離、趨化性、多向分化潛能、免疫調(diào)節(jié)作用以及不受倫理問題的制約等獨特的生物學特性近年來已經(jīng)成為干細胞療法研究者眼中的時代寵兒，但是其繁雜的分離培養(yǎng)手段使其工業(yè)化應用受到了嚴重的限制，因此建立規(guī)范化的分離、培養(yǎng)及在符合FDA質(zhì)量標準要求下快速大量獲得治療量細胞的標準生產(chǎn)工藝迫在眉睫，因此本部分內(nèi)容對脂肪間充質(zhì)干細胞規(guī)范化分離培養(yǎng)及體外快速大量擴增進行研究。
　　研究表明，我們可以在實驗室

7、規(guī)范化的分離培養(yǎng)出符合ISCT標準的脂肪間充質(zhì)干細胞:具有呈成纖維樣細胞形態(tài)生長的特性，陽性表達CD73，CD90，CD105表面標志物，不表達造血系統(tǒng)來源的CD11b or CD14，CD34，CD45，CD19 orCD79α，HLA-DR等表面標志物的特性，和在體外誘導條件下，可以分化成脂肪細胞、成骨細胞、及軟骨細胞的特性。無血清培養(yǎng)條件優(yōu)化結(jié)果來看，相對有血清培養(yǎng)基培養(yǎng)的間充質(zhì)干細胞，我們所采用的無血清培養(yǎng)基可以有效促進間充質(zhì)干