Chemerin寡肽對(duì)不同基因型小鼠前脂肪細(xì)胞成脂分化中Wnt-_-catenin信號(hào)通路的影響.pdf

1、肥胖的發(fā)生與脂肪組織過(guò)度增殖和分化有關(guān)，脂肪細(xì)胞的分化過(guò)程中存在復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)調(diào)控。Chemerin/CMKLR1信號(hào)通路、Wnt/?-catenin信號(hào)通路和TNF-α共同參與成脂分化過(guò)程。
　　敲低chemerin后成脂分化過(guò)程被抑制，說(shuō)明chemerin在成脂分化過(guò)程中起關(guān)鍵作用，但其作用機(jī)制尚未見(jiàn)報(bào)道。
　　激活Wnt/?-catenin信號(hào)通路可以通過(guò)抑制成脂關(guān)鍵分子PPARγ的表達(dá)抑制成脂。研究表明，添加外源cheme

2、rin全蛋白（1μg/ml）可降低骨骼肌細(xì)胞GSK-3?的磷酸化水平。GSK-3?是?-catenin降解復(fù)合物的組成分子，而?-catenin是Wnt/?-catenin信號(hào)通路的關(guān)鍵分子。我們猜測(cè)在成脂分化過(guò)程中，chemerin與Wnt/?-catenin信號(hào)通路存在串話。
　　脂肪細(xì)胞因子 TNF-α也參與成脂分化過(guò)程，對(duì)前脂肪細(xì)胞的分化起抑制作用。其與chemerin/CMKLR1信號(hào)通路、Wnt/?-catenin信號(hào)

3、通路密切相關(guān)。
　　本實(shí)驗(yàn)利用實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有野生型（WT）、TNF-α缺失(TNF-α-/-)、瘦素受體基因突變(Leprdb/db，db/db）以及瘦素受體和TNF-α雙基因突變（DT）小鼠，從其腹股溝處內(nèi)臟白色脂肪組織中分離脂肪干細(xì)胞（ADSCs）進(jìn)行原代培養(yǎng)，于成脂誘導(dǎo)的同時(shí)添加chemerin149-157寡肽（C9）處理細(xì)胞，在成脂誘導(dǎo)的4個(gè)不同時(shí)期（誘導(dǎo)前I0、誘導(dǎo)早期I3、誘導(dǎo)中期 I7、誘導(dǎo)后期I14）固定細(xì)胞、抽提細(xì)

4、胞總 RNA以及抽提細(xì)胞總蛋白，分別從形態(tài)學(xué)、靶基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上探究C9對(duì)不同基因型小鼠原代ADSCs成脂分化中Wnt/?-catenin信號(hào)通路的影響。
　?。?）通過(guò)人主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞(HA-VSMCs)遷移、NIH3T3細(xì)胞增殖及WT小鼠原代ADSCs蛋白免疫印跡檢測(cè)ERK磷酸化水平實(shí)驗(yàn)，證明添加的C9寡肽對(duì)于促進(jìn)HA-VSMCs遷移、促進(jìn)NIH3T3細(xì)胞增殖以及提高WT小鼠原代ADSCs ERK蛋白磷酸化水平具有

5、生物學(xué)活性，10 nM是其最佳效應(yīng)濃度。
　?。?）形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，四種不同基因型小鼠ADSCs成脂率高低順序?yàn)門(mén)NF-α-/-小鼠>WT小鼠>DT小鼠>Leprdb/db小鼠；C9對(duì)四種基因型小鼠ADSCs成脂分化的成脂率、脂滴大小和脂滴出現(xiàn)的時(shí)間均無(wú)顯著影響。
　?。?）針對(duì)靶基因轉(zhuǎn)錄水平的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：與非處理組相比，C9處理組四種基因型小鼠ADSCs成脂標(biāo)志分子 PPARγ2、adiponectin、C/EBPα和C/E

6、BP?的mRNA水平無(wú)顯著差異（p>0.05）；Wnt/?-catenin信號(hào)通路關(guān)鍵分子如Wnt10b、?-catenin的mRNA水平，在處理組和非處理組之間，也無(wú)顯著差異（p>0.05）。
　　（4）針對(duì)靶基因翻譯水平的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：與非處理組相比，C9處理組的四種基因型小鼠ADSCs的adiponectin水平無(wú)顯著差異（p>0.05），Wnt/?-catenin信號(hào)通路關(guān)鍵分子?-catenin蛋白水平顯著下調(diào)（p<0.05

7、）。
　　以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，添加外源C9對(duì)四種不同基因型小鼠ADSCs成脂分化的成脂率、脂滴大小、脂滴出現(xiàn)時(shí)間，成脂相關(guān)分子 PPARγ2、adiponectin、C/EBPα和C/EBP?的mRNA水平，成脂相關(guān)分子adiponectin的蛋白水平，均無(wú)顯著影響。另外，添加外源C9對(duì)四種不同基因型小鼠 ADSCs成脂分化中Wnt/?-catenin信號(hào)通路關(guān)鍵分子 Wnt10b和?-catenin的RNA水平無(wú)顯著影響（p>0.