鈣化性納米微粒致腎結(jié)石大鼠模型的建立及其致腎結(jié)石機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的：利用鈣化性納米微粒（calcifying nanoparticles，CNPs）建立腎結(jié)石大鼠模型;通過在建模過程的不同時間段檢測大鼠尿液中的中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)、骨橋蛋白(OPN)、單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)的含量，初步分析CNPs致大鼠腎結(jié)石的形成機(jī)制，為臨床腎結(jié)石患者的治療和預(yù)防復(fù)發(fā)提供新的思路。
　　方法：利用腎結(jié)石患者PCNL術(shù)中所得結(jié)石培養(yǎng)出的CNPs，制成CNPs混懸液。40只S

2、D雄性大鼠隨機(jī)分為4組:CNPs誘石組(A1、A2、A3組)、空白對照組（B組）。CNPs混懸液通過鼠尾靜脈注射感染A組大鼠，B組大鼠經(jīng)鼠尾靜脈同時注射等量0.9％生理鹽水。分別于注射后4小時、12小時、24小時、1周、2周及8周用代謝籠收集大鼠尿液，用ELISA方法檢測各時間段大鼠尿液中的中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白、骨橋蛋白及單核細(xì)胞趨化蛋白-1的含量。分別于注射后1周、2周、8周分批次處死大鼠，腎臟組織Von Kossa染色加

3、核固紅復(fù)染后于光鏡下鑒定造模是否成功，腎臟組織HE染色后于光鏡下觀察其結(jié)晶形成情況及病理改變，對照分析結(jié)晶的形成情況與大鼠尿液中NGAL、OPN、MCP-1的含量變化間的關(guān)系。
　　結(jié)果：大鼠腎臟組織經(jīng)過Von Kossa染色加核固紅復(fù)染后在光鏡下觀察:注射后第8周時A組腎臟組織內(nèi)可見散在不規(guī)則分布的黑褐色或者棕褐色鈣鹽晶體，主要分布于近曲小管和遠(yuǎn)曲小管;B組大鼠腎臟組織內(nèi)未見明顯鈣鹽結(jié)晶，故鑒定CNPs致腎結(jié)石大鼠模型建立成功。

4、在注射后4小時，A組的NGAL水平(1913.46±223.23ng/L)與B組的NGAL水平(1583.54±57.49ng/L)比較即開始增高(P＜0.05)，而A組的OPN（18.99±2.22μg/L）、MCP-1(457.70±3.50ng/L)水平相比于B組的OPN（15.59±2.30μg/L）、MCP-1(437.07±6.82ng/L)水平則無明顯差異(p＞0.05);在注射后第2周，A組的OPN(28.00±2.69

5、μg/L)、MCP-1(573.78±50.22ng/L)水平相比于B組的OPN(16.40±1.54μg/L)、MCP-1(525.92±29.95ng/L)水平開始出現(xiàn)大幅度升高(P＜0.05);在注射后第8周，A組的NGAL(3978.85±810.81ng/L)、 OPN(33.35±10.93μg/L)、 MCP-1(734.07±201.47ng/L)含量相比于 B組的NGAL(1642.58±109.75ng/L)、 OP

6、N(18.56±2.93μg/L)、 MCP-1(534.81±51.14ng/L)含量均顯著增高(P＜0.05)。與注射CNPs后4小時大鼠尿液中NGAL水平相比，A組中NGAL水平變化隨著時間的增加呈上升趨勢(P＜0.05);與注射CNPs后4小時大鼠尿液中OPN、MCP-1水平相比,2周前A組大鼠尿中OPN、MCP-1水平呈緩慢升高狀態(tài)，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，2周后A組大鼠尿液中OPN、MCP-1水平開始大幅度增高，8周時

7、A組大鼠尿液中OPN、MCP-1水平增至最高(P＜0.05)。大鼠腎臟經(jīng)HE染色后置于光鏡下觀察:注射后第1周，A組大鼠腎臟組織可見少量腎小管上皮細(xì)胞顆粒樣變性，腎小管內(nèi)未見鈣鹽晶體沉積;注射后第2周時，A組大鼠腎小管內(nèi)可見少量鈣鹽晶體沉積，伴有少數(shù)腎小管上皮細(xì)胞顆粒樣變性和空泡樣變性;注射后第8周時，A組腎小管內(nèi)可見大量鈣鹽晶體沉積，伴有廣泛腎小管上皮細(xì)胞空泡樣變性;B組腎臟組織未見鈣鹽沉積和病理改變。注射CNPs1周后，隨著腎小管上

8、皮細(xì)胞損傷的加重，A組大鼠尿液中NGAL水平也不斷升高，同時腎小管內(nèi)鈣鹽晶體的沉積量也隨腎小管上皮細(xì)胞損傷的加重而增多;注射CNPs2周后A組大鼠尿液中的NGAL、OPN、MCP-1含量均隨著腎小管內(nèi)鈣鹽晶體的沉積量增加而不同程度地升高。
　　結(jié)論：CNPs感染大鼠后可以誘導(dǎo)大鼠腎臟內(nèi)鈣鹽晶體的生成和聚集，最終導(dǎo)致大鼠產(chǎn)生腎結(jié)石;CNPs在感染大鼠4小時后即開始損傷腎小管上皮細(xì)胞;2周后腎小管內(nèi)開始出現(xiàn)鈣鹽晶體的粘附和聚集，OPN