茯苓水溶性多糖預(yù)防大鼠腎結(jié)石形成作用機(jī)制研究.pdf

1、目的:泌尿系結(jié)石是泌尿系統(tǒng)最常見(jiàn)、最痛苦的疾病之一。在世界各地，它的發(fā)病率有所不同，在亞洲發(fā)病率為1-5％，在歐洲為5-9％，北美洲為13％，沙特阿拉伯為20％，世界上只有極少的地區(qū)泌尿系結(jié)石的發(fā)病率較低，如格陵蘭、日本沿海地區(qū)。同其他疾病不同，泌尿系結(jié)石可以追溯到人類的遠(yuǎn)古時(shí)期。大約80％的泌尿系結(jié)石由草酸鈣組成。泌尿系結(jié)石可以引起尿路梗阻、感染、血尿、腎積水和腎功能不全。隨著腔內(nèi)泌尿外科技術(shù)的發(fā)展和體外震波碎石技術(shù)的引入，在泌尿系結(jié)

2、石治療方面取得了很大進(jìn)展。目前，泌尿系結(jié)石病人很少接受開放手術(shù)治療。接受ESWL治療的病人可以出現(xiàn)出血、高血壓、腎小管壞死、腎臟纖維化、急性腎臟功能損傷、腎功能下降和導(dǎo)致結(jié)石復(fù)發(fā)率升高。而且，泌尿系結(jié)石的一個(gè)非常顯著的特點(diǎn)是其高復(fù)發(fā)率。據(jù)報(bào)道，在沒(méi)有采取任何預(yù)防措施的情況下，泌尿系結(jié)石1年復(fù)發(fā)率接近10％，5年復(fù)發(fā)率33％，10年復(fù)發(fā)率50％，15年復(fù)發(fā)率高達(dá)75％。至今沒(méi)有有效的方式預(yù)防泌尿系結(jié)石的復(fù)發(fā)。腎結(jié)石的形成是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，

3、由過(guò)飽和、晶核形成、結(jié)晶生長(zhǎng)、結(jié)晶聚集、結(jié)晶腎小管滯留等幾個(gè)階段構(gòu)成。從廣泛上來(lái)講，腎結(jié)石可以分為兩大類:組織附著型結(jié)石和組織非附著型結(jié)石。腎上皮細(xì)胞暴露于草酸/草酸鈣結(jié)晶時(shí)可以導(dǎo)致活性氧產(chǎn)量增加，氧化應(yīng)激增強(qiáng)，繼發(fā)細(xì)胞損傷和炎癥。到目前為止，腎上皮細(xì)胞損傷在腎結(jié)石的發(fā)展中起重要作用這一觀點(diǎn)已經(jīng)得到大多數(shù)專家的認(rèn)同。據(jù)報(bào)道，在人類、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、體外實(shí)驗(yàn)的研究中已經(jīng)得出結(jié)論:泌尿系結(jié)石存在時(shí)氧化應(yīng)激升高。草酸鹽可以升高氧化應(yīng)激，抗氧化可以降

4、低氧化應(yīng)激。自由基、和擁有非成對(duì)電子的分子和原子統(tǒng)稱為活性氧。活性氧具有很強(qiáng)的活性，同時(shí)在很多信號(hào)旁路中起重要作用。另外，它們可以對(duì)很多細(xì)胞成分產(chǎn)生損害和化學(xué)修飾，如核苷酸、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、碳水化合物?；钚匝踔饕ㄑ趸瘉喌杂苫⒘u自由基、過(guò)氧化氫、和超氧陰離子。氧化亞氮自由基主要由內(nèi)皮細(xì)胞氧化亞氮自由基合成酶介導(dǎo)的L-精氨酸的氧化時(shí)生成。超氧陰離子主要是黃嘌呤氧化酶、還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶、血紅素氧化酶、脂氧化酶、環(huán)氧合

5、酶等酶的產(chǎn)物、和作為呼吸鏈的副產(chǎn)物生成。脂自由基同樣可以產(chǎn)生超氧陰離子。內(nèi)皮細(xì)胞氧化亞氮自由基合成酶產(chǎn)生超氧陰離子的能力超過(guò)產(chǎn)生氧化亞氮自由基的能力。氧化亞氮自由基和超氧陰離子之間反應(yīng)可以產(chǎn)生具有高反應(yīng)性的過(guò)氧化亞硝酸鹽ONOO-。細(xì)胞自身同時(shí)配備有清除活性氧的系統(tǒng)，如清除超氧陰離子的超氧化物歧化酶、清除過(guò)氧化氫的谷胱甘膚過(guò)氧化物酶和過(guò)氧化氫酶。在正常狀態(tài)下，細(xì)胞通過(guò)相應(yīng)的酶系嚴(yán)格控制活性氧的產(chǎn)生，并參與相應(yīng)的調(diào)控系統(tǒng)和信號(hào)旁路。但是，

6、活性氧的過(guò)量生產(chǎn)和/或細(xì)胞抗氧化能力的降低可以導(dǎo)致氧化應(yīng)激的發(fā)展。因?yàn)榛钚匝醮嬖跁r(shí)間短和運(yùn)動(dòng)能力低，氧化應(yīng)激認(rèn)為是活性氧和碳水化合物、蛋白質(zhì)、核苷酸、脂質(zhì)之間反應(yīng)的副產(chǎn)物所致。丙二醛、氧化脂質(zhì)是活性氧誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激的主要副產(chǎn)物。氧化應(yīng)激可以損傷細(xì)胞的所有組成成分，并可被抗氧化劑擬制。植物藥物自從人類歷史出現(xiàn)記載后就已經(jīng)開始應(yīng)用，至今已有幾千年的歷史。目前，自然植物藥物已在亞洲廣泛應(yīng)羯，同時(shí)在歐洲、美國(guó)也獲得越來(lái)越多的人認(rèn)同。有很多植物藥

7、物自古就用于防治泌尿系結(jié)石并取褥良好效果，但是這些植物藥物防治泌尿系結(jié)石的具體作用機(jī)制仍未清楚。茯苓是最常見(jiàn)的傳統(tǒng)中國(guó)植物藥物之一，并在防治泌尿系結(jié)石方面得到廣泛應(yīng)用。茯苓水溶性多糖在茯苓中含量較少，是其在水中提取的主要活性物質(zhì)。β-（1-3）-D-多糖是茯苓中的主要成分，但基本沒(méi)有任何生物活性，但是其衍生物已被實(shí)驗(yàn)證實(shí)具有抗腫瘤等活性。在本實(shí)驗(yàn)中，我們想研究茯苓水溶性多糖預(yù)防大鼠草酸鈣腎結(jié)石形成中的作用機(jī)制。
　　 方法:在雄

8、性Wistar大鼠研究茯苓水溶性多糖預(yù)防大鼠腎結(jié)石形成的作用機(jī)制。應(yīng)用0.8％乙二醇和1％氯化銨8天誘導(dǎo)大鼠成石。除了應(yīng)用乙二醇/氯化銨外，另外給予茯苓水溶性多糖溶液灌胃(150mg/kg)，陽(yáng)性對(duì)照組給予乙二醇/氯化銨，陰性對(duì)照組大鼠正常飲水，同時(shí)給予自來(lái)水灌胃。每組大鼠包括6只大鼠。8天后，收集24小時(shí)尿并測(cè)量尿Ph值、鈣、鎂、草酸含量，左腎用于草酸鈣結(jié)晶沉積評(píng)價(jià)，應(yīng)用elisa法測(cè)量右腎MDA、SOD、CAT含量。
　　

9、結(jié)果:陰性對(duì)照組大鼠體重正常增長(zhǎng)，陽(yáng)性對(duì)照組大鼠體重明顯減輕，茯苓水溶性多糖干預(yù)組大鼠體重減輕程度小于陽(yáng)性對(duì)照組。陽(yáng)性對(duì)照組大鼠每個(gè)大鼠腎臟切片均有結(jié)晶沉積，茯苓水溶性多糖干預(yù)組大鼠腎臟切片結(jié)晶沉積評(píng)分明顯低于陽(yáng)性對(duì)照組。陽(yáng)性對(duì)照組大鼠尿量同陰性對(duì)照組大鼠無(wú)明顯變化，茯苓水溶性多糖干預(yù)組尿量同陽(yáng)性對(duì)照組比較明顯增加。茯苓水溶性多糖干預(yù)組大鼠尿草酸含量少于陽(yáng)性對(duì)照組，但無(wú)明顯差異，但陽(yáng)性對(duì)照組、茯苓水溶性多糖干預(yù)組大鼠尿草酸含量同陰性對(duì)照

10、組具有明顯差異。茯苓水溶性多糖干預(yù)組大鼠尿鎂含量較陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組明顯升高。陽(yáng)性對(duì)照組大鼠腎臟SOD、CAT較陰性對(duì)照組含量明顯降低，MDA含量明顯升高。而茯苓水溶多糖干預(yù)組大鼠腎臟SOD、CAT含量較陽(yáng)性對(duì)照組明顯升高，MDA含量明顯降低。
　　 結(jié)論:對(duì)乙二醇/氯化銨誘導(dǎo)的大鼠應(yīng)用茯苓水溶性多糖溶液灌胃，可以有效的預(yù)防泌尿系結(jié)石的形成。其預(yù)防泌尿系結(jié)石的機(jī)制有可能與茯苓水溶性多糖的利尿作用、升高尿鎂含量和擬制氧化應(yīng)激作