產(chǎn)甲酸草酸桿菌預(yù)防草酸鈣腎結(jié)石的作用研究.pdf

1、研究背景及目的：
　　目前腎結(jié)石是世界排名第三的泌尿系統(tǒng)疾病，由于人口老齡化、全球氣候變暖、生活及飲食方式改變、肥胖流行以及更加精確的診斷手段等原因，腎結(jié)石患病率將進(jìn)一步提高。過(guò)去，人們往往認(rèn)為腎結(jié)石是一種急性病，但越來(lái)越多的證據(jù)顯示它亦是一種慢性系統(tǒng)性疾病，最終可能引起終末期腎臟病。晚近有研究發(fā)現(xiàn)腎結(jié)石患者心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)增高。草酸鈣結(jié)石是腎結(jié)石最常見的類型，占所有結(jié)石的70％-80％。尿液中草酸濃度升高是草酸鈣結(jié)石形成的重要因素

2、，過(guò)度飽和的草酸和鈣結(jié)合形成草酸鈣結(jié)晶，足夠多的草酸鈣結(jié)晶聚合形成草酸鈣結(jié)石。尿草酸含量受到飲食中草酸、鈣和維生素D攝入以及內(nèi)源性草酸產(chǎn)生的影響。20％～53％的尿草酸來(lái)自飲食中的草酸攝入，即外源性草酸。內(nèi)源性草酸是肝臟降解甘氨酸、乙醛酸等的終產(chǎn)物，人體主要通過(guò)三種渠道排泄草酸:5％～10％分泌到腸腔，與鈣離子結(jié)合形成不溶性草酸鈣隨糞便排出體外或被腸道微生物降解，90％～95％經(jīng)腎臟隨尿液排出，因此增加腸道中草酸降解和排泄可能是預(yù)防和治

3、療草酸鈣結(jié)石的有效方法之一。1985年科學(xué)家首次發(fā)現(xiàn)腸道產(chǎn)甲酸草酸桿菌可降解草酸，人體腸道產(chǎn)甲酸草酸桿菌密度差異很大，從完全缺乏到108/g腸內(nèi)容物都普遍存在，高含量的產(chǎn)甲酸草酸桿菌每日可降解0.5-1g草酸，而絕大多數(shù)草酸鈣腎結(jié)石患者的腸道中缺乏這種菌，因此補(bǔ)充這種益生菌可大大降低草酸鈣腎結(jié)石的發(fā)生及復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。目前關(guān)于產(chǎn)甲酸草酸桿菌的研究大部分集中于國(guó)外，國(guó)內(nèi)相關(guān)研究甚少，本研究的目的是從健康人腸道中篩選出產(chǎn)甲酸草酸桿菌，研究其預(yù)防草

4、酸鈣結(jié)石的作用，為國(guó)內(nèi)相關(guān)藥物研發(fā)提供可靠依據(jù)。
　　研究方法：
　　1、從健康人新鮮糞便中篩選產(chǎn)甲酸草酸桿菌，經(jīng)分離、培養(yǎng)、純化、鑒定得到產(chǎn)甲酸草酸桿菌菌株，將菌株擴(kuò)增至不同濃度(106cfu/mL、107cfu/mL、108cfu/mL)。
　　2、在雄性SD大鼠飲水中添加0.8％乙二醇建立草酸鈣結(jié)石模型。
　　3、每日以1mL活菌干預(yù)草酸鈣結(jié)石動(dòng)物模型，定期稱重并收集大鼠血樣及尿樣，檢測(cè)血鈣、血鎂、血磷、B

5、UN、Scr、尿草酸、尿鈣、尿鎂、尿磷變化，4周后麻醉大鼠，取其腎臟，橫切片并作HE染色，偏光鏡下觀察腎臟結(jié)晶含量，作Yasue染色觀察草酸鹽沉積。
　　研究結(jié)果：
　　1、經(jīng)16s rRNA序列測(cè)定，我們從健康人新鮮糞便中分離出的產(chǎn)甲酸草酸桿菌與已知ATCC35274相似度為100％，由此判定所獲得菌種為產(chǎn)甲酸草酸桿菌。
　　2、飲水中添加0.8％EG建立草酸鈣結(jié)石模型后大鼠24小時(shí)尿草酸排泄量顯著升高，濃度梯度產(chǎn)甲

6、酸草酸桿菌干預(yù)草酸鈣結(jié)石模型4周，106cfu、107cfu治療組大鼠24小時(shí)尿草酸排出量與單純?cè)炷＝M差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而108cfu治療組在第一周末24小時(shí)尿草酸排泄量顯著低于造模組，且持續(xù)至第四周末。
　　3、干預(yù)4周后，106cfu、107cfu組與造模組草酸評(píng)分差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，108cfu組腎臟草酸評(píng)分顯著低于造模組。
　　4、造模組大鼠體重、Scr、BUN較對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明草酸鈣結(jié)石模型的腎功能未

7、受到影響。與對(duì)照組及造模組相比，三個(gè)治療組大鼠體重及腎功能差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明產(chǎn)甲酸草酸桿菌耐受性好。
　　研究結(jié)論：
　　本實(shí)驗(yàn)已篩選出人源產(chǎn)甲酸草酸桿菌，并將菌種保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，且已在Genebank申請(qǐng)序列，目前培養(yǎng)最高濃度為107cfu/ml，還需要進(jìn)一步對(duì)菌種進(jìn)行優(yōu)化，提高發(fā)酵濃度，縮短發(fā)酵時(shí)間;每日給予108cfu產(chǎn)甲酸草酸桿菌可安全、有效降低大鼠尿草酸排泄量，有效預(yù)防腎臟草酸鈣結(jié)晶形成從而抑制結(jié)