去甲氧基姜黃素、雙去甲氧基姜黃素對(duì)肝細(xì)胞癌HepG2細(xì)胞中ICAM-1和VCAM-1表達(dá)的影響.pdf

1、目的：我國(guó)是全球肝細(xì)胞癌發(fā)病率和死亡率最高的國(guó)家。目前肝細(xì)胞癌的死亡率在我國(guó)所有的腫瘤死亡率中排第2位，且近年來(lái)有明顯的上升趨勢(shì)。肝細(xì)胞癌的惡性程度較高，早期無(wú)典型的臨床癥狀，起病隱匿性高，發(fā)展迅速，多數(shù)患者在就診時(shí)已經(jīng)出現(xiàn)轉(zhuǎn)移，錯(cuò)過(guò)了行根治性手術(shù)的時(shí)機(jī)，并且肝細(xì)胞癌的放化療效果不理想。其發(fā)生侵襲與轉(zhuǎn)移使肝細(xì)胞癌治療的預(yù)后較差，因此探討肝細(xì)胞癌的侵襲和轉(zhuǎn)移機(jī)制具有重要意義。
　　腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移過(guò)程是一個(gè)的動(dòng)態(tài)復(fù)雜的連續(xù)過(guò)程，這一

2、過(guò)程涉及到腫瘤細(xì)胞與機(jī)體內(nèi)正常細(xì)胞相互作用等多個(gè)步驟，細(xì)胞粘附在此過(guò)程中是一個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)。在其中發(fā)揮關(guān)鍵作用的是能夠介導(dǎo)細(xì)胞粘附的粘附分子。粘附分子的作用廣泛，能夠使組織結(jié)構(gòu)保持正常、參與體內(nèi)的免疫應(yīng)答、促進(jìn)傷口的愈合、介導(dǎo)細(xì)胞間粘附使腫瘤易于侵襲和轉(zhuǎn)移等。ICAM-1和 VCAM-1是免疫球蛋白超基因家族中的成員，作為重要的細(xì)胞粘附分子，二者普遍存在于多種細(xì)胞（如血管內(nèi)皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等）的表面。在正常細(xì)胞中，ICAM-1和V

3、CAM-1無(wú)表達(dá)或者很少表達(dá)，但是在許多腫瘤組織中可見(jiàn)高表達(dá)，如肝癌、乳腺癌、胃癌、腎癌、結(jié)腸癌等。腫瘤細(xì)胞完成轉(zhuǎn)移要穿過(guò)一些屏障，包括宿主的細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜等。而腫瘤細(xì)胞表面的ICAM-1和VCAM-1可通過(guò)與各自的配體結(jié)合后相互作用，使癌細(xì)胞與這些屏障的粘附增強(qiáng)，繼而腫瘤細(xì)胞降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜，到達(dá)遠(yuǎn)處部位形成轉(zhuǎn)移病灶。
　　姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素均屬于姜黃素類化合物，三者是由姜科植物姜黃中提取到的酚類

4、有色色素。研究發(fā)現(xiàn)，去甲氧基姜黃素、雙去甲氧基姜黃素是姜黃素的衍生物，三者不僅結(jié)構(gòu)相仿，而且具有相似的藥理作用，如抗炎、抗氧化、抗病毒、抗動(dòng)脈粥樣硬化和抗腫瘤等。關(guān)于其抗腫瘤方面的特性以往的研究較多，研究證明，姜黃素能夠抑制包括肝癌、胃癌、乳腺癌和結(jié)腸癌等在內(nèi)的多種常見(jiàn)惡性腫瘤細(xì)胞的進(jìn)展，使癌細(xì)胞凋亡。但是姜黃素在體外易氧化，水溶性較差，口服不易吸收，生物利用度不高，使其廣泛應(yīng)用受到限制。而去甲氧基姜黃素、雙去甲氧基姜黃素在穩(wěn)定性和生物

5、利用度方面好于姜黃素，有較好的應(yīng)用前景。
　　去甲氧基姜黃素、雙去甲氧基姜黃素抗腫瘤的多靶點(diǎn)性，說(shuō)明其通過(guò)多種途徑發(fā)揮作用，具體的作用機(jī)制現(xiàn)今仍未清楚，需要深入的探究。近年來(lái)有文獻(xiàn)報(bào)告，ICAM-1和VCAM-1在肝癌患者的組織和血清中表達(dá)較正常人明顯增強(qiáng)，其與肝細(xì)胞癌的侵襲轉(zhuǎn)移聯(lián)系十分密切，二者可作為監(jiān)測(cè)腫瘤轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的指標(biāo)。研究證實(shí)，阻斷VCAM-1及其受體功能的發(fā)揮，有利于卵巢癌的治療。去甲氧基姜黃素、雙去甲氧基姜黃素是否可以

6、抑制肝細(xì)胞癌HepG2細(xì)胞中ICAM-1和VCAM-1的表達(dá)，目前的報(bào)道較少見(jiàn)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究去甲氧基姜黃素、雙去甲氧基姜黃素對(duì)肝細(xì)胞癌 HepG2細(xì)胞中ICAM-1和VCAM-1的作用，初步探究姜黃素類化合物抑制人肝癌HepG2細(xì)胞侵襲與轉(zhuǎn)移的可能機(jī)制。
　　方法：
　　1、常規(guī)培養(yǎng)肝細(xì)胞癌HepG2細(xì)胞;用不相同濃度（10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L）的姜黃素、去甲氧基姜黃素、雙去甲氧基姜黃素作用于H

7、epG2細(xì)胞24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)，然后MTT法檢測(cè)對(duì)細(xì)胞增殖的影響。
　　2、用不同濃度（0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L）的姜黃素、去甲氧基姜黃素、雙去甲氧基姜黃素干預(yù)肝細(xì)胞癌HepG2細(xì)胞,通過(guò)劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的侵襲能力。
　　3、不同濃度（0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L）的姜黃素、去甲氧基姜黃素、雙去甲氧基姜黃

8、素處理 HepG2細(xì)胞24小時(shí)后，通過(guò)Western Blot方法檢測(cè)HepG2細(xì)胞中ICAM-1和VCAM-1表達(dá)的變化。
　　結(jié)果：1、MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示：不同濃度的姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素處理HepG2細(xì)胞后，均使HepG2細(xì)胞增殖受抑制，呈時(shí)間、劑量依賴性（P＜0.05）。
　　2、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果為：經(jīng)不同濃度（10μmol/L、20μmol/L及40μmol/L）的三種藥物處理細(xì)胞24小時(shí)后，與

9、對(duì)照組（0μmol/L）相比劃痕距離明顯增加（P＜0.05）。
　　3、Transwell小室實(shí)驗(yàn)結(jié)果為：經(jīng)不同濃度（10μmol/L、20μmol/L及40μmol/L）的三種藥物作用24小時(shí)后，與對(duì)照組（0μmol/L）相比HepG2細(xì)胞穿過(guò)濾膜的細(xì)胞數(shù)量均減少（P＜0.05）。且隨著藥物濃度的增加，穿過(guò)濾膜的HepG2細(xì)胞數(shù)量明顯減少，差異顯著（P＜0.05）。三種藥物均能抑制肝癌 HepG2細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移，去甲氧基姜黃素

10、和雙去甲氧基姜黃素的抑制作用強(qiáng)于姜黃素（P＜0.05）。
　　4、 Western Blot方法結(jié)果顯示：與對(duì)照組對(duì)比（0μmol/L），不同濃度（10μmol/L、20μmol/L及40μmol/L）的姜黃素、去甲氧基姜黃素、雙去甲氧基姜黃素處理 HepG2細(xì)胞24小時(shí)后，HepG2細(xì)胞中 ICAM-1和VCAM-1的表達(dá)均受到抑制（P＜0.05）。相同濃度（40μmol/L）的姜黃素、去甲氧基姜黃素、雙去甲氧基姜黃素作用肝細(xì)胞

11、癌HepG2細(xì)胞24小時(shí)后，Western Blot結(jié)果顯示，三者抑制HepG2細(xì)胞中ICAM-1表達(dá)的強(qiáng)弱順序?yàn)椋弘p去甲氧基姜黃素＞去甲氧基姜黃素＞姜黃素（P＜0.05）。作用于HepG2細(xì)胞中24小時(shí)后，對(duì)于VCAM-1表達(dá)的影響為：雙去甲氧基姜黃素的抑制作用強(qiáng)于去甲氧基姜黃素和姜黃素（P＜0.05）。
　　結(jié)論：去甲氧基姜黃素、雙去甲氧基姜黃素均可使HepG2細(xì)胞的增殖及侵襲轉(zhuǎn)移受到抑制，作用效果優(yōu)于姜黃素。去甲氧基姜黃素及