姜黃素對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷時(shí)NF-κB、ICAM-1、Caspase-3蛋白表達(dá)及細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：觀察大鼠腦缺血再灌注損傷（ischemia reperfusion injury）時(shí)海馬神經(jīng)元核因子κB（Nuclear factor-κB，NF-κB）及細(xì)胞間黏附分子1（Intercellularadhesion molecular1，ICAM-1），caspase-3隨再灌注時(shí)間表達(dá)變化的情況，觀察姜黃素（curcumin，cur）對(duì)三者表達(dá)及細(xì)胞凋亡的影響，探討姜黃素腦保護(hù)的分子機(jī)制。 研究方法：制作Sprague

2、-dawley（S-D）大鼠全腦缺血再灌注損傷模型。實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組（BC組）、假手術(shù)組（S組）、缺血組（IR組）、姜黃素預(yù)處理組（Cur組）及溶劑對(duì)照組（SC組）；BC組不做任何處理；S組僅燒灼雙側(cè)椎動(dòng)脈，游離雙側(cè)頸總動(dòng)脈但不阻斷；其余三組在燒灼雙側(cè)椎動(dòng)脈、游離雙側(cè)頸總動(dòng)脈后24小時(shí)，阻斷雙側(cè)頸總動(dòng)脈15分鐘，造成四動(dòng)脈阻塞全腦缺血模型。Cur組、SC組大鼠分別在缺血前1小時(shí)腹腔注射姜黃素（200 mg/kg）或等容積溶媒。除BC組

3、外，其余各組于再灌注后2h、6h、1d、3d、7d處死。將各組動(dòng)物分為兩個(gè)亞組（n＝5），第Ⅰ組多聚甲醛固定后取腦，HE染色觀察海馬錐體細(xì)胞形態(tài)改變、TUNEL法觀察海馬CA1區(qū)凋亡細(xì)胞數(shù)、免疫組化觀察海馬NF-κB蛋白和caspase-3的表達(dá)；第Ⅱ組大鼠取新鮮海馬組織，勻漿后取上清液，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定海馬組織ICAM-1蛋白含量。 結(jié)果：1．光鏡觀察：S組海馬各區(qū)錐體細(xì)胞排列整齊，邊界清楚，核膜邊界清晰，核仁深染、清晰

4、。IR組細(xì)胞輪廓消失，大部分細(xì)胞出現(xiàn)胞漿固縮，核固縮、碎裂。Cur組70%細(xì)胞邊界基本清楚，核形狀基本規(guī)則，核邊界基本清晰，但少數(shù)細(xì)胞出現(xiàn)核染色變深，胞漿部分消失等變性表現(xiàn)。 2．NF-κB表達(dá)的變化：S組各時(shí)間點(diǎn)海馬CA1區(qū)無(wú)NF-κB的陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)。缺血再灌注（IR組、Cur組、SC組）2h各組亦無(wú)NF-κB陽(yáng)性細(xì)胞出現(xiàn)。IR組在缺血再灌注6h后，大鼠缺血腦細(xì)胞內(nèi)可見NF-κB的表達(dá)（17．56±4．62），并隨再灌注時(shí)間而

5、表達(dá)逐漸增多，再灌注1d其表達(dá)值達(dá)最高峰（49．52±10．28），3d時(shí)表達(dá)明顯較前兩時(shí)點(diǎn)減少（36．52±8．71），7d時(shí)則更低（12．68±3．06）。各時(shí)間點(diǎn)間比較均有顯著性差異（P<0．05）。與IR組相比，Cur組海馬CA1區(qū)NF-κB的表達(dá)規(guī)律與IR組相似，即在再灌注后6h開始表達(dá)，1d達(dá)表達(dá)高峰后開始回落，至7d降至最低水平。Cur組海馬CA1區(qū)在再灌注后6h、1d、3d、7d四點(diǎn)NF-κB的表達(dá)水平均明顯低于相應(yīng)時(shí)間

6、點(diǎn)IR組及SC組（P<0．05）。 3．ICAM-1蛋白含量：假手術(shù)S組各時(shí)間點(diǎn)海馬區(qū)ICAM-1蛋白有少量表達(dá)，缺血再灌注后，2h大鼠海馬ICAM-1蛋白有少量表達(dá)，6h蛋白含量開始增加，1d時(shí)含量達(dá)高峰，3d還保持較高水平，7d迅速降低達(dá)基礎(chǔ)水平，與S組比較，6h，1d，3d有顯著差異（P<0．01）。再灌注后各時(shí)間點(diǎn)Cur組海馬ICAM-1蛋白含量均低于IR組及SC組，其中在1d和3d時(shí)間點(diǎn)有顯著差異（P<0．05）。

7、 4．Caspase-3表達(dá)的變化：S組各時(shí)間點(diǎn)無(wú)Caspase-3蛋白表達(dá)，其余各組在再灌注6h Caspase-3蛋白表達(dá)開始增高，1d達(dá)峰并持續(xù)到3d開始下降，7d仍有較弱表達(dá)。IR組再灌注6h、1d、3d各點(diǎn)Caspase-3蛋白表達(dá)水平明顯高于Cur組（P<0．05），Cur組再灌注6h、1d、3d各點(diǎn)Caspase-3蛋白表達(dá)水平明顯低于SC組（P<0．05）。 5．凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)：各實(shí)驗(yàn)組凋亡細(xì)胞主要集中在CA1

8、區(qū)，再灌注2h出現(xiàn)少量凋亡細(xì)胞后逐漸增加，3d達(dá)到高峰后減少，至7d仍有少量凋亡細(xì)胞存在，IR組各時(shí)間點(diǎn)凋亡細(xì)胞數(shù)明顯高于S組、SC組及Cur組（P<0．05），Cur組凋亡細(xì)胞數(shù)明顯少于SC組（P<0．05）。 結(jié)論：大鼠腦缺血再灌注可引起海馬CA1區(qū)神經(jīng)元ICAM-1及NF-κB的異常表達(dá)，且隨再灌注時(shí)間呈動(dòng)態(tài)變化，提示ICAM-1及NF-κB參與了缺血再灌注損傷過(guò)程。姜黃素可減輕腦缺血后海馬CA1區(qū)病理?yè)p害及凋亡發(fā)生，其機(jī)