前列腺素E1預處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷NF-κB及ICAM-1表達的影響.pdf

1、近年來,隨著心肌梗死后溶栓治療、冠狀動脈搭橋術(shù)、經(jīng)皮冠脈腔內(nèi)成形術(shù)等心臟介入性治療的廣泛開展,為挽救缺血心肌、縮小心肌梗死面積、改善患者臨床癥狀起到了良好的效果。然而由此帶來的心肌缺血再灌注損傷(MIRI)成為影響手術(shù)效果及病人預后的關(guān)鍵因素,如何減輕缺血再灌注損傷(IRI)成為亟待解決的問題。PGEI具有抑制血小板聚集、血栓素A2生成、動脈粥樣脂質(zhì)斑塊及免疫復合物形成的作用,并能擴張外周和冠脈血管。本課題組曾對PGE1保護心肌的作用做

2、了大量的實驗研究,證實其可以改善缺血再灌注心肌血流動力學；有效減少心肌細胞CPK和LDH的漏出,減輕心肌細胞超微結(jié)構(gòu)的損傷；增強再灌注心肌SOD活性,減少MDA的生成,通過抗心肌脂質(zhì)過氧化途徑有效減輕MIRI；促進bcl-2蛋白表達,抑制bax蛋白表達,明顯抑制缺氧復氧心肌細胞的凋亡；提高心肌內(nèi)Gαq／11的含量,促進KATP通道開放,減輕鈣超載；促進PKC和HSP的表達,提高細胞的應激反應能力,保護缺血再灌注心肌。然而,對于PGE1預

3、處理在大鼠離體心肌缺血再灌注損傷中NF-κB和ICAM-1的表達所介導的炎癥損傷以及NF-κB和ICAM-1之間的聯(lián)系,尚未見報道。因此,本實驗通過Western blot技術(shù)和免疫組化方法觀察NF-κB和ICAM-1在缺血再灌注心肌中的表達規(guī)律,探討其在PGE1預處理對大鼠離體心肌缺血再灌注損傷中的作用,為PGE1作為藥理性預適應(PPC)的有效藥物在防治心血管疾病方面的廣泛應用提供理論依據(jù)。
　　 目的:
　　 采用

4、Langendorff大鼠離體心臟灌流裝置制備心肌缺血再灌注損傷模型,探討PGE1預處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷心肌細胞NF-κB及ICAM-1蛋白表達的影響,進一步從炎癥信號通路揭示PGE1對心肌缺血再灌注損傷保護作用的可能機制。
　　 研究方法:
　　 成年健康SD大鼠,雌雄各半,體重250-300g,隨機分為五組,每組8只:正常對照組、缺血再灌注組和PGE1小、中、大劑量(14μg／L、42μg／L、126μg／L

5、)預處理組,每組先用正常臺式液平衡灌流15min,正常對照組繼續(xù)用正常臺式液持續(xù)灌流3h；缺血再灌注組用正常臺式液灌流30min后停灌30min,然后再用正常臺式液灌流2h；PGE1各劑量(14μg／L、42μg／L、126μg／L)預處理組以正常臺式液平衡灌流15min后換用含不同劑量PGE1的正常臺式液灌流30min,停灌30min,以正常臺式液再灌注2h。灌流結(jié)束后速取左心室前壁,分為兩部分:一部分固定制備病理切片,HE染色觀察大

6、鼠心肌組織形態(tài)學的變化,并采用免疫組化法測定NF-κB及ICAM-1的表達變化；另一部分于液氮中凍存留做Western blot,半定量檢測心肌細胞內(nèi)NF-κB表達量的變化。結(jié)果應用SPSS17.0軟件包進行單因素方差分析,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差((x)±s)表示,組間比較采用LSD法,檢驗結(jié)果均取α=0.05作為檢驗水準。
　　 結(jié)果:
　　 1各組大鼠心肌組織形態(tài)學的變化
　　 光鏡下觀察,正常對照組心肌組織形態(tài)

7、學未見異常改變,肌纖維完整,染色均勻,心肌細胞排列緊密,橫紋清晰,間質(zhì)未見血管擴張和炎性細胞浸潤；缺血再灌注組大范圍心肌纖維斷裂、腫脹、壞死融合,染色不均勻,心肌細胞排列不規(guī)則,橫紋消失,間質(zhì)血管明顯擴張和大量炎性細胞浸潤；PGE1小劑量(14μg／L)預處理組較大范圍心肌纖維斷裂、腫脹,心肌細胞排列紊亂,部分橫紋消失,間質(zhì)有血管擴張和炎性細胞浸潤,但程度較缺血再灌注組有所減輕；PGE1中劑量(42μg／L)預處理組心肌纖維腫脹,但少有

8、斷裂,間質(zhì)血管擴張不明顯,有少量炎性細胞浸潤；PGE1大劑量(126μg／L)預處理組少許心肌纖維腫脹,無斷裂,間質(zhì)內(nèi)未見血管擴張,偶有炎性細胞浸潤,形態(tài)學近似于正常對照組。
　　 2免疫組化染色法測定各組大鼠心肌組織中NF-κB及ICAM-1的表達
　　 (1)缺血再灌注組心肌組織NF-κB的表達量為47.36±3.27,與正常對照組(19.99±4.59)相比,其表達量明顯增加(P<0.05)。與缺血再灌注組相比,P

9、GE1各劑量預處理組(14μg／L、42μg／L、126μg／L)心肌組織NF-κB的表達量明顯減少,分別為39.29±2.63、30.49±3.24、24.41±4.00(P<0.05)。PGE1各劑量預處理組之間兩兩比較,均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 (2)缺血再灌注組心肌組織ICAM-1的表達量為50.26±7.04,與正常對照組(22.98±5.28)相比,其表達量明顯增加(P<0.05)。與缺血再灌注組相比,

10、PGE1各劑量預處理組(14μg／L、42μg／L、126μg／L)心肌組織ICAM-1的表達量明顯減少,分別為42.28±4.69、34.96±4.01、29.51±4.82(P<0.05)。PGE1各劑量預處理組之間進行兩兩比較,均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 3 Western blot測定各組大鼠心肌組織中NF-κB的表達
　　 NF-κB在缺血再灌注組(0.842±0.016)的表達較正常對照組(0.2

11、78±0.015)明顯增加(P<0.05)；與缺血再灌注組相比,PGE1各劑量預處理組(14μg／L、42μg／L、126μg／L)NF-κB的表達量依次減少,分別為0.682±0.023,0.527±0.019,0.390±0.015(P<0.05)。PGE1各劑量預處理組之間兩兩比較,均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1 PGE1預處理可以改善大鼠缺血再灌注心肌纖維形態(tài)學變化,有效減輕離體大鼠心肌