復(fù)方江南卷柏提取物抗痛風(fēng)作用及其制劑研究.pdf

1、痛風(fēng)屬于中醫(yī)痹癥范疇，治療以清熱利濕解毒為主。復(fù)方江南卷柏由江南卷柏、土茯苓和車(chē)前子組成。江南卷柏具有活血祛瘀、涼血止血、清熱利濕等功效；其對(duì)黃嘌呤氧化酶有明顯抑制作用，可以抑制尿酸的產(chǎn)生，在民間用于治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎。土茯苓是泄?jié)峤舛镜牧妓?，可起到解毒、除濕、通利關(guān)節(jié)的效果。車(chē)前子清熱利濕、滲濕通淋，具有利尿等作用，可通過(guò)利尿促進(jìn)體內(nèi)尿酸排泄。三藥配伍，可化濕泄?jié)?，增?qiáng)療效，能明顯改善癥狀，降低血尿酸濃度。本文主要研究復(fù)方江南卷柏的抗痛

2、風(fēng)作用、可能的作用機(jī)制及其物質(zhì)基礎(chǔ)，同時(shí)開(kāi)展制劑的制備工藝和成型研究，為開(kāi)發(fā)治療高尿酸血癥和急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的成方制劑提供依據(jù)。
　　目的:研究復(fù)方江南卷柏提取物（CSME）對(duì)高尿酸血癥(HUA)和急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎(AGA)的影響及其可能的機(jī)制；在此基礎(chǔ)上以藥效指導(dǎo)復(fù)方江南卷柏水提醇沉工藝及其制劑的成型工藝研究。
　　方法:以昆明小鼠為受試對(duì)象，以氧嗪酸鉀鹽和腺嘌呤制備高尿酸血癥(HUA)模型，采用生化法研究 SME對(duì) HU

3、A小鼠體內(nèi)尿酸(UA)、肌酐(Cr)和尿素氮(Bun)水平的影響；以 SD大鼠為受試對(duì)象，以關(guān)節(jié)腔注射尿酸鹽制備急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎(AGA)模型，采用生化法檢測(cè)大鼠血清中髓過(guò)氧化物酶(MPO)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平，采用ELISA法檢測(cè)大鼠血清中腫瘤壞死因子(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)水平研究 SME的抗炎作用，以關(guān)節(jié)組織病理切片評(píng)價(jià)大鼠關(guān)節(jié)損傷情況；以 HPLC圖譜對(duì)江南卷柏水提取物(SME)的主

4、要成分進(jìn)行分析；以昆明小鼠為受試對(duì)象，以氧嗪酸鉀鹽制備 HUA模型，采用生化法研究復(fù)方江南卷柏水提物(CSME)對(duì) HUA小鼠體內(nèi) UA水平的影響；以 SD大鼠為受試對(duì)象，以關(guān)節(jié)腔注射尿酸鹽制備 AGA模型，采用生化法檢測(cè)大鼠血清中一氧化氮(NO)水平，采用ELISA法檢測(cè)大鼠血清中前列腺素-2(PGE-2)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)和白介素-8(IL-8)水平研究CSME的抗炎作用，以關(guān)節(jié)組織病理切片評(píng)價(jià)大鼠

5、關(guān)節(jié)損傷情況；以昆明小鼠為受試對(duì)象，采用最大給藥量法研究江南卷柏及其復(fù)方的臨床用藥安全性；以復(fù)方江南卷柏水提取物為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，以加水量、提取時(shí)間、提取次數(shù)為考察因素，以芹菜素-6-C-β-D-吡喃葡萄糖-8-C-β-D-吡喃木糖苷(YⅡ)、落新婦苷和浸膏率為指標(biāo)，采用多指標(biāo)綜合分析法優(yōu)選其提取工藝，以溶液密度、終點(diǎn)乙醇濃度、醇沉靜置時(shí)間和醇沉溫度為考察因素，以芹菜素-6-C-β-D-吡喃葡萄糖-8-C-β-D-吡喃木糖苷(YⅡ)、落新婦苷

6、和浸膏率為指標(biāo)，采用多指標(biāo)綜合分析法優(yōu)選其醇沉工藝；采用單因素法以成型率、含水量、流動(dòng)性和吸濕性為指標(biāo)對(duì)其制劑輔料種類(lèi)、配比和潤(rùn)濕劑加入量進(jìn)行優(yōu)選。
　　結(jié)果:(1)江南卷柏水提物抗HUA實(shí)驗(yàn)：與正常組相比，模型組小鼠體內(nèi)UA、Cr和Bun水平顯著增加(P<0.01)；與模型組相比，別嘌醇組體內(nèi)尿酸水平顯著降低，Cr和 Bun水平顯著增加(P<0.01)，而江南卷柏低、中、高劑量組均可降低高尿酸小鼠的UA、Cr和Bun水平，并且呈

7、現(xiàn)劑量相關(guān)性。
　　(2)江南卷柏水提物抗 AGA實(shí)驗(yàn)：與正常組相比，模型組大鼠的踝關(guān)節(jié)周長(zhǎng)、MPO、IL-1β、TNF-α和 MDA水平顯著增加(P<0.01)；SOD水平下降；與模型組相比，江南卷柏低、中、高劑量組大鼠的踝關(guān)節(jié)周長(zhǎng)、MPO、IL-1β、TNF-α和 MDA水平則有所降低，SOD水平相對(duì)升高，并呈現(xiàn)劑量依賴(lài)性，以高劑量組效果最顯著(P<0.01)，與秋水仙堿組效果相當(dāng)；由組織病理切片可知正常組大鼠關(guān)節(jié)腔注射生理鹽

8、水后在軟骨和滑膜部位具有輕微炎癥，而模型組大鼠則有大量白細(xì)胞浸潤(rùn)，然而服用秋水仙堿和江南卷柏則可降低組織炎癥水平。
　　(3)以 HPLC色譜結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)綜合分析得江南卷柏水提取物中的主要成分為芹菜素-6，8-二-C-β-D-吡喃葡萄糖苷，芹菜素-6-C-β-D-吡喃葡萄糖-8-C-β-D-吡喃木糖苷，芹菜素-6-C-β-D-吡喃木糖-8-C-β-D-吡喃葡萄糖苷的復(fù)合物，5-羧甲基-4′-羥基-黃酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷

9、，穗花杉雙黃酮。
　　(4)復(fù)方江南卷柏抗 HUA實(shí)驗(yàn):與正常組相比，模型組小鼠體內(nèi) UA水平顯著增加(P<0.01)；與模型組相比，別嘌醇組和復(fù)方江南卷柏組可降低小鼠血清UA水平，其中3:1:1復(fù)方江南卷柏(CSME-3)較2:1:1復(fù)方江南卷柏(CSME-2)具有更好的降 UA作用，而且也優(yōu)于江南卷柏、車(chē)前子和土茯苓分別單獨(dú)使用。
　　(5)復(fù)方江南卷柏抗AGA實(shí)驗(yàn):與正常組相比，模型組大鼠的踝關(guān)節(jié)周長(zhǎng)、NO、PGE-2

10、、IL-8和IL-1β的水平顯著增加(P<0.01)；與模型組相比，各中藥給藥組大鼠的踝關(guān)節(jié)周長(zhǎng)、NO、PGE-2、IL-6、IL-8和IL-1β的水平則有所降低，其中CSM-3效果顯著(P<0.01)，和秋水仙堿組無(wú)顯著性差異(P>0.05)，其在某些指標(biāo)上的效果較秋水仙堿相當(dāng)更佳。由組織病理切片可知正常組大鼠關(guān)節(jié)腔注射生理鹽水后在軟骨和滑膜部位具有輕微炎癥，而模型組大鼠則有大量白細(xì)胞浸潤(rùn)，然而服用秋水仙堿、CSM-2、CSM-3、車(chē)

11、前子和土茯苓則降低組織炎癥水平。
　　(6)急性毒性實(shí)驗(yàn): SME和CSME以最大給藥量灌胃(分別相當(dāng)于成人臨床日用量的640倍和480倍)，各組小鼠均無(wú)死亡和明顯中毒癥狀，各小鼠的肝腎組織切片完整無(wú)明顯病變，可認(rèn)為臨床用藥安全。
　　(7)復(fù)方江南卷柏水提醇沉工藝優(yōu)選:綜合評(píng)分法優(yōu)選 CSME最佳提取工藝為加12倍水量煎煮3次每次1h，經(jīng)驗(yàn)證該工藝穩(wěn)定可行；最佳醇沉工藝為藥液密度為0.5g2 mL-1，加入95％乙醇至表觀

12、醇沉濃度為60%，醇沉36h，靜置溫度15℃，經(jīng)驗(yàn)證該工藝穩(wěn)定可行。
　　(8)復(fù)方江南卷柏制劑工藝:劑型為顆粒劑；制粒工藝條件為原料：甘露醇：糊精1:0.375:1.125；95%作潤(rùn)濕劑其用量為0.4 mL2g-1。
　　結(jié)論:(1)江南卷柏可抑制高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平，同時(shí)對(duì)高尿酸小鼠腎臟損害具有保護(hù)作用；江南卷柏可明顯改善急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠的關(guān)節(jié)腫脹和關(guān)節(jié)滑膜及周?chē)M織的病理變化，其作用機(jī)制可能與其抗氧化和抑制

13、血清TNF-α及IL-1β水平有關(guān)。
　　(2)復(fù)方江南卷柏水提取物具有降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸的作用；對(duì)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎也具有治療作用，其中以3:1:1組方的復(fù)方江南卷柏效果最佳，其作用機(jī)制可能是抑制炎癥因子的合成與釋放相關(guān)。
　　(3)江南卷柏及其復(fù)方分別以相當(dāng)于成人640倍和480倍的劑量給藥，無(wú)明顯毒性反應(yīng)，安全性良好可用于臨床治療。
　　(4)優(yōu)選的復(fù)方江南卷柏水提醇沉工藝合理簡(jiǎn)便，穩(wěn)定可行，可為其開(kāi)發(fā)應(yīng)用