單壁碳納米角抑制人膠質(zhì)瘤細胞增殖與促進其凋亡的作用機制研究.pdf

1、目的:
　　研究單壁碳納米角(SWNHs)是通過何種途徑來對人膠質(zhì)瘤細胞的增殖過程進行抑制，并誘導(dǎo)其凋亡過程。
　　方法:
　　1.利用鋪有不同濃度SWNHs的6孔板或培養(yǎng)皿接種人膠質(zhì)瘤細胞系U251細胞，培養(yǎng)一定時間后，通過普通電子倒置顯微鏡和共聚焦激光顯微鏡來對細胞的形態(tài)和數(shù)目進行觀察。
　　2.BrdU檢測SWNHs對細胞增殖和有絲分裂的影響; SWNHs對U251細胞增殖和活力的影響分別用XTT法和CCK

2、8法來定量地評價。
　　3.SWNHs對膠質(zhì)瘤細胞凋亡及細胞周期的影響采用流式細胞術(shù)進行評價;Western Blot法分析SWNHs材料導(dǎo)致膠質(zhì)瘤細胞凋亡相關(guān)蛋白。
　　4.使用Seahorse XF24分析儀測量不同濃度SWNHS對U251細胞氧氣消耗量的影響，采用生物發(fā)光法進行ATP生產(chǎn)分析，及通過發(fā)光法檢測不同濃度SWNHS培養(yǎng)后的U251細胞的產(chǎn)生NAD的影響，全面評估SWNHS對U251細胞的線粒體功能影響。

3、r>　　結(jié)果:
　　1.人膠質(zhì)瘤U251細胞分別和具有濃度梯度的SWNHs材料共同培后，在設(shè)定的時間用倒置顯微鏡對細胞進行觀察，結(jié)果提示隨著SWNHs濃度的增加，U251細胞數(shù)量呈逐漸減少，細胞不能完全正常貼壁生長，細胞變圓固縮，甚至有些細胞死亡后漂浮在培養(yǎng)液中;共聚焦激光顯微鏡觀察結(jié)果示U251細胞的核發(fā)生固縮，且生成大量的核小體碎片。
　　2.根據(jù)XTT法和CCK8法的實驗結(jié)果，證明了SWNHs抑制U251細胞增殖存在時

4、間和劑量依賴關(guān)系。
　　3.流式細胞術(shù)檢測提示SWNHs顯著誘導(dǎo)U251細胞凋亡，并且凋亡相關(guān)蛋白Bad、Bax的濃度與SWNHS的濃度呈正相關(guān)，而凋亡抑制蛋白Bcl-2隨著SWNHS的濃度增加而減少，呈負相關(guān)。
　　4.SWNHS影響U251細胞的線粒體功能:細胞氧消耗量、ATP產(chǎn)生和NAD的功能都以劑量依賴的方式受到阻礙。
　　結(jié)論:
　　SWNHs抑制人膠質(zhì)瘤細胞生長和增殖，并促進膠質(zhì)瘤細胞凋亡，同時存在劑