線粒體呼吸鏈參與血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細胞生物能學(xué)改變機制探討.pdf

1、血管緊張素Ⅱ(AngiotensinⅡ，AngⅡ)與其受體結(jié)合，可以促進多種心血管疾病的發(fā)展，內(nèi)皮細胞作為血管壁的第一道屏障，可以接觸血液中的AngⅡ，極易受到損傷。內(nèi)皮細胞受損會加速動脈粥樣硬化、心梗、心臟衰竭等疾病的發(fā)展。之前認為內(nèi)皮細胞較少依賴線粒體產(chǎn)生ATP，但是不可否認的是內(nèi)皮線粒體參與維持鈣濃度穩(wěn)定、活性氧(ROS)生產(chǎn)和NO的平衡。AngⅡ作用于人臍靜脈內(nèi)皮細胞(Human umbilical vein endotheli

2、al Cells，HUVECs)后，細胞內(nèi)線粒體生物能學(xué)的改變及其機制尚不明確。
　　目的:以HUVECs為研究對象，探討在AngⅡ引起的氧化應(yīng)激損傷中，線粒體呼吸鏈生物能學(xué)和線粒體復(fù)合物Ⅰ活性改變及其可能機制。
　　方法:選擇HUVECs為研究對象，用不同濃度的AngⅡ處理細胞。
　　1.采用流式細胞術(shù)檢細胞凋亡率、細胞周期、胞內(nèi)ROS水平和線粒體膜電位;
　　2.采用海馬能量測定儀測量內(nèi)皮細胞基礎(chǔ)呼吸、最大呼

3、吸率、ATP生成量、質(zhì)子漏、呼吸控制率;
　　3.采用紫外分光光度計檢測線粒體復(fù)合物Ⅰ活性;
　　4.篩選線粒體呼吸鏈復(fù)合物Ⅰ主要亞基ND1、ND2，采用免疫蛋白印跡法檢測其在各組HUVECs中的表達變化。
　　結(jié)果:
　　1.與對照組相比，HUVECs隨AngⅡ濃度增加（10-8 mol/L～10-5 mol/L）凋亡細胞百分率增加，細胞凋亡指數(shù)分別為24.52±2.37、27.91±1.57、41.13±1.

4、06和66.32±1.34，均明顯高于對照組(16.37±1.21)。細胞內(nèi)ROS產(chǎn)生也逐漸增加，至10-5 mol/L時，ROS值明顯高于對照組(88.31±6.04 vs.40.53±4.10，n=3，P＜0.001)。10-9 mol/L AngⅡ可使細胞增殖較對照組明顯增加(AngⅡ10-9 mol/Lvs.Ctrl:35.56±2.69 vs.22.64±5.21，n=5，P＜0.05)。AngⅡ組細胞內(nèi)△Ψm明顯低于對照組(

5、34.62±3.52 vs.26.79±2.43，n=3，P=0.033)。
　　2.HUVECs基礎(chǔ)呼吸隨AngⅡ濃度增加呈先增加后降低趨勢，10-5 mol/L AngⅡ組細胞的基礎(chǔ)呼吸較對照組下降顯著（AngⅡ10-5 mol/L:26.5±0.8 vs.Ctrl:41.6±2.5，n=5，P＜0.01）。AngⅡ?qū)TP的產(chǎn)生也顯示先增加后減低的作用。高濃度AngⅡ使HUVECs呼吸儲備明顯下降(AngⅡ10-6 mol/

6、L:12.3±1.8 vs.Ctrl:22.3±1.5，n=5,P＜0.01);(AngⅡ10-5 mol/L:10.2±0.8 vs.Ctrl:22.3±1.5,n=5，P＜0.01)。而AngⅡ10-7 mol/L組和AngⅡ10-8 mol/L組較對照組升高，(AngⅡ10-8 mol/L:28.2±1.1 vs.Ctrl:22.3±1.5，n=5,P＜0.01);(AngⅡ10-7mol/L:27.5±2.3 vs.Ctrl:2

7、2.3±1.5,n=5, P＜0.01)。
　　3.對照組和AngⅡ組線粒體呼吸鏈復(fù)合物Ⅰ活性分別為5.6±2.4和4.2±2.1U/ml，兩組間有顯著差異（n=3，P＜0.05）。
　　4.隨著AngⅡ濃度升高，ND1和ND2亞基的表達下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.發(fā)現(xiàn)HUVECs凋亡隨AngⅡ濃度增高而加重，其原因可能為細胞內(nèi)ROS生成增多，線粒體膜電位下降所致，而較低濃度An

8、gⅡ可以誘導(dǎo)細胞增殖。
　　2.高濃度AngⅡ破壞了線粒體呼吸鏈的正常功能，使線粒體正常的呼吸功能減弱、ATP合成障礙、最大呼吸能力減退。
　　3.短時間AngⅡ尚未影響線粒體的正常運作，長時間的AngⅡ刺激會損傷呼吸鏈功能，可能為破壞了呼吸鏈結(jié)構(gòu)、質(zhì)子漏產(chǎn)生增多，呼吸儲備能力降低所致。
　　4.AngⅡ可以導(dǎo)致線粒體呼吸鏈復(fù)合物Ⅰ活性降低以及ND1和ND2的表達下降，其原因可能為AngⅡ引起的氧化應(yīng)激損傷破壞了mtD