血管緊張素-（1-7）對(duì)血管緊張素Ⅱ激活人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞p38MAPK的拮抗作用.pdf

1、目的：采用一定濃度的Ang II誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)，用不同濃度的Ang-(1-7)共育，以磷酸化p38MAPK為指標(biāo)，應(yīng)用Westem blot方法檢測(cè)磷酸化p38MAPK的表達(dá)；并用RT-PCR方法檢測(cè)了Ang-(1-7)發(fā)揮此作用的特異性受體Mas，揭示Ang-(1-7)拮抗Ang II促炎作用的可能機(jī)制，從而進(jìn)一步明確Ang-(1-7)的心血管保護(hù)作用，為心血管疾病防治和用藥提供新的理論依據(jù)。

2、方法：1、臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)鑒定；2、試驗(yàn)分組及方法 1)磷酸化p38MAPK測(cè)定，分兩大組：Ⅰ組：(1)對(duì)照組培養(yǎng)液不加干擾因素；(2)Ang-(1-7)組加入Ang-(1-7)100nmol/L(終濃度，以下同)作用20分鐘；(3)Ang Ⅱ組加入Ang II100nmol/L作用5分鐘；(4)Ang-(1-7)+AngⅡ組先加入Ang-(1-7)100nmol/L20分鐘后再加入100nmol/L的AngII作用5分鐘；(5)A-

3、779+Ang-(1-7)+Ang Ⅱ組先加入Ang(1-7)受體拮抗劑A-779 10,000nmol/L 10分鐘，再加Ang-(1-7)100nmol/L20分鐘，最后加入終濃度為100nmol/LAng II作用5分鐘；(6)A-779組加A-779 10,000nmol/L單獨(dú)作用10分鐘。Ⅱ組：(1)對(duì)照組培養(yǎng)液不加干擾因素；(2)Ang Ⅱ組加入Ang II100nmol/L；(3)--[6)組Ang-(1-7)+Ang

4、Ⅱ組分別加入Ang-(1-7)10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L、10,000nmol/L后再加入Ang II100nmo/L。以上各組作用時(shí)間同Ⅰ組，各組離心后收集沉淀細(xì)胞，提取蛋白后用Western blot法檢測(cè)蛋白表達(dá)。2)Mas受體測(cè)定：(1)--(5)組分加入Ang-(1-7)0nmol/L、10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L、10，000nmol/L20分鐘后用Trizol抽

5、提RNA，用RT-PCR法檢測(cè)mRNA。 結(jié)果：1、正常細(xì)胞生長(zhǎng)良好，呈鵝卵石樣鑲嵌排列，細(xì)胞透明度大，輪廓不清。熒光免疫組化染色法，可檢測(cè)到培養(yǎng)的HUVECs的VⅢ因子相關(guān)抗原為陽(yáng)性；2、與對(duì)照組比較，100nmol/L Ang II作用于培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞，HUVECs p38MAPK磷酸化表達(dá)顯著增加(21.7±0.18，p<0.005)；100nmol/L Ang-(1-7)組、10，000 nmol/L A-779組可以檢

6、測(cè)到少量的磷酸化p38MAPK表達(dá)，分別為1.22±0.12、1.05±0.11，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)；3、與Ang Ⅱ組比較，Ang-(1-7)+Ang Ⅱ組，p38MAPK磷酸化表達(dá)顯著減少(1.69±0.19，P<0.01)；A-779+Ang-(1-7)+Ang Ⅱ組HUVECs p38MAPK磷酸化表達(dá)則無(wú)明顯變化(2.21±0.27，p>0.05；4、與Ang Ⅱ組比較，隨著Ang-(1-7)濃度增加(10、100

7、、1000、10，000nmol/L)，Ang-(1-7)+Ang Ⅱ組HUVECs p38MAPK磷酸化表達(dá)逐漸減少，在100、1000 nmol/L時(shí)，p38MAPK磷酸化表達(dá)分別減少為(1.67±0.15，P<0.01)、(1.33±0.11，p<0.01)，在10，000nmol/L時(shí)p38MAPK磷酸化表達(dá)為(1.09±0.07，P<0.005)。 結(jié)論：1、Ang II可使內(nèi)皮細(xì)胞p38MAPK磷酸化表達(dá)明顯增加。；