流式細(xì)胞術(shù)檢測中性粒細(xì)胞膜堿性磷酸酶方法的建立及初步臨床應(yīng)用.pdf

1、目的：
　　應(yīng)用熒光標(biāo)記特異性抗堿性磷酸酶抗體和QuantiBRITETM PE定量系統(tǒng)，建立流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometry，F(xiàn)CM）檢測中性粒細(xì)胞膜堿性磷酸酶（alkaline phosphatase on the surface membrane of neutrophils，mNAP）表達(dá)的方法，并初步應(yīng)用于細(xì)菌與病毒感染的鑒別診斷和血流感染的預(yù)測。
　　方法：
　　1．應(yīng)用熒光標(biāo)記特異性抗堿性磷酸酶抗

2、體，建立FCM檢測外周血mNAP表達(dá)的方法。運(yùn)用QuantiBRITETM PE于流式細(xì)胞儀評估每個(gè)細(xì)胞結(jié)合的堿性磷酸酶抗體數(shù)(AB/c)，間接反映待測細(xì)胞mNAP的表達(dá)量。
　　2．觀察肝素、乙二胺四乙酸二鉀、檸檬酸鈉3種抗凝劑，標(biāo)本放置溫度、時(shí)間以及血漿中堿性磷酸酶對mNAP檢測結(jié)果的影響，評價(jià)方法精密度。
　　3．用所建方法檢測481名健康人群外周血mNAP表達(dá)水平，對數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，以2.5％～97.5%位數(shù)作為

3、臨床參考區(qū)間。
　　4．檢測84例細(xì)菌感染患者和39例病毒感染患者外周血mNAP表達(dá)水平，分析兩組間mNAP差異有無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5．收集2013年6月至2014年10月住院疑似血流感染而行血培養(yǎng)檢查的298例患者的全血和血清。FCM檢測mNAP，電化學(xué)發(fā)光法檢測血清降鈣素原（PCT），免疫散射比濁法檢測C反應(yīng)蛋白（CRP）。采用ROC曲線評價(jià)mNAP、PCT、CRP預(yù)測血流感染價(jià)值。
　　結(jié)果：
　　1．樣

4、本檢測前，應(yīng)用磷酸鹽緩沖液洗滌可以有效消除血漿中堿性磷酸酶干擾。3種抗凝劑采集的標(biāo)本對mNAP檢測結(jié)果均無影響。標(biāo)本室溫或4℃放置，其mNAP在12 h內(nèi)無明顯變化。精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果，批內(nèi)變異系數(shù)（CV）2.01%～3.33%，批間CV5.80%～6.00%。
　　3．481名健康成年人無論男女，外周血mNAP表達(dá)水平均呈非正態(tài)分布。男、女中位數(shù)（P25，P75）分別為1758（1378～2310） AB/c、1897（1369～3

5、249）AB/c，性別之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（U=27140，P=0.2438）。以2.5%～97.5%位數(shù)為臨床參考區(qū)間，結(jié)果為920.5～3493.0 AB/c。
　　4．細(xì)菌感染患者外周血mNAP表達(dá)水平13532（9756～16869） AB/c高于病毒感染患者1143（536～2012）AB/c以及健康對照人群1879（1399～2497）AB/c（H=221.5，P<0.01）。
　　5．298例患者中，根據(jù)病原微

6、生物學(xué)證實(shí)感染109例，其中血培養(yǎng)結(jié)果為革蘭氏陽性菌組43例，革蘭氏陰性菌組66例，血培養(yǎng)陰性189例。mNAP預(yù)測血流感染的曲線下面積為0.878，診斷最佳切點(diǎn)為9899AB/c，敏感性為80.8%，特異性為84.1%，陽性預(yù)測值為74.6%，陰性預(yù)測值為88.3%。在mNAP、PCT與CRP三個(gè)指標(biāo)中， mNAP預(yù)測診斷血流感染的效能最高，可作為血流感染診斷的生物標(biāo)志物。
　　結(jié)論：
　　1.成功建立應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)定量檢