頭皮位點藥物注射對痙攣型腦性癱瘓大鼠周圍神經(jīng)、骨骼肌及運動功能影響的研究.pdf

1、腦性癱瘓(Cerebral palsy CP)是指由于發(fā)育中胎兒和嬰兒腦的非進(jìn)行性損傷所致持續(xù)性運動和姿勢發(fā)育異常、活動受限的一組綜合征[1]。是最常見的兒童致殘性疾病之一[2]。據(jù)流行病學(xué)報道,腦癱患兒發(fā)病率約為2.1‰[3]?；純憾喟橛卸喾N運動障礙相關(guān)的情況,以及感知、認(rèn)知、溝通、和行為方面的障礙，這些多個障礙共存情況會對孩子以后的生長發(fā)育及最后融入社會造成嚴(yán)重影響[4]。認(rèn)清、理解這些障礙的原因、其相互之間的關(guān)系及這些障礙對運動障

2、礙的影響對于腦癱的治療和康復(fù)計劃的實施,至關(guān)重要。
　　痙攣型腦性癱瘓的最初臨床癥狀描述可以追溯到18世紀(jì)30年代，英國矯形外科醫(yī)生李德創(chuàng)建了皇家矯形醫(yī)院（Rroyal Orthopedic Hospital），1844年他將在該醫(yī)院工作多年所得到的矯形經(jīng)驗整理并發(fā)表在 Lancet雜志上，在這里首次提出了痙攣強(qiáng)直（Spastic Rigidity）的概念。并在1953年在《on the Nature and Treatment

3、of Deformities of the Human Frame》一書中論述了CP患兒常合并重復(fù)障礙，并介紹了一名典型的痙攣型腦性癱瘓病例；1861年李德在倫敦產(chǎn)科學(xué)會講演中列舉200多例痙攣強(qiáng)直患兒與分娩、難產(chǎn)、早產(chǎn)、新生兒窒息等因素與CP的關(guān)系，并在1889年在論文《the Cerebral Paralysis of Children：A clinical study from the infirmary of nervous d

4、isease》中首次使用了痙攣性癱瘓（ cerebral paralysis）、痙攣性雙癱瘓（spastic diplegia）等，李德是首次將腦性癱瘓引入醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的，也首次將痙攣型腦性癱瘓展現(xiàn)在人們面前，因此痙攣型腦性癱瘓也被稱為“李德病”。德國學(xué)者frend提出CP的病因很多，CP表現(xiàn)癥狀為一種癥候群。1932年phelps使用了大腦性損害來形容CP，并最終解釋CP為以隨意運動障礙為主題。后來諸多學(xué)者多以“李德病”或“強(qiáng)直痙攣”來命

5、名這類疾病。1948年美國以CP作為腦性癱瘓的專用語沿用至今。但是時至今日，英國一直沿用“spastic”。我國對腦性癱瘓的認(rèn)識較晚，直到20世紀(jì)50年代及60年代一直使用“嬰兒癱”或“大腦癱”，并且由于當(dāng)時國內(nèi)小兒麻痹癥發(fā)病率較高，痙攣型腦性癱瘓經(jīng)常被誤診為小兒麻痹癥后遺癥。直到20世紀(jì)70年代我國對CP的研究才進(jìn)入一定深度，逐漸將腦性癱瘓、痙攣型腦性癱瘓和小兒麻痹癥后遺癥區(qū)分開。1988年第一屆全國小兒腦癱座談會正式提出了腦性癱瘓的

6、定義為出生前到出生后1個月內(nèi)發(fā)育期非進(jìn)行性腦損傷導(dǎo)致的綜合征，主要表現(xiàn)為中樞性運動障礙及姿勢異常。并制定了我國腦癱的分型標(biāo)準(zhǔn)，按臨床表現(xiàn)明確分為包括痙攣型（spastic）在內(nèi)的8型。該定義和分型為我國首次提出，有重要學(xué)術(shù)價值。2004年《中華兒科雜志》編輯委員會、中華醫(yī)學(xué)會兒科學(xué)分會神經(jīng)學(xué)組提出新的分型，按臨床表現(xiàn)分成包括痙攣型在內(nèi)的5型，并且將痙攣型CP分成：單癱、雙癱、三肢癱、四肢癱5型；2006年提出的腦癱分型對痙攣型腦癱的分型

7、未見變化。2014年“第六屆全國兒童康復(fù)、第十三屆全國小兒腦癱康復(fù)學(xué)術(shù)會議”對腦癱定義、分型進(jìn)行了修改，將腦癱定義修訂為：CP為一組由于發(fā)育中胎兒或嬰幼兒腦部非進(jìn)行性損傷，引起的運動和姿勢發(fā)育持續(xù)性障礙綜合征，它導(dǎo)致活動受限。腦性癱瘓的運動障礙常伴有感覺、知覺、認(rèn)知、交流及行為障礙，伴有癲癇及繼發(fā)性肌肉骨骼問題。并將2004年痙攣型腦癱分型中的單癱和三肢癱取消，歸入偏癱和四肢癱的范疇。將腦癱分為痙攣型四肢癱、痙攣型雙癱、痙攣型偏癱、不隨

8、意運動型、共濟(jì)失調(diào)型、混合型六種類型。
　　痙攣型腦癱肌肉的痙攣是導(dǎo)致的周圍神經(jīng)和肌肉損傷的重要原因[5]，痙攣狀態(tài)[6]的特點是不隨意肌的激活，增加在被動拉伸肌肉的抵抗力,引起關(guān)節(jié)被動運動困難。臨床上公認(rèn)被動活動的抵抗力增加于腦癱患兒自主運動障礙關(guān)系緊密。肌肉痙攣引起腦性癱瘓的活動受限、周圍神經(jīng)和骨骼肌病變的干預(yù)治療，目前還沒有相關(guān)研究。Ross and Engsberg[7]解釋的是粗大運動的發(fā)育而不是痙攣對活動受限的影響。這

9、是與其他兩個報告[8-9]一致的，上肢肌肉力量差的因素與 CP痙攣狀態(tài)比較對于兒童/青少年精細(xì)運動功能影響更大。痙攣型腦癱障礙肢體被動運動的阻力感覺是由于被動和主動肌肌張力的變化引起的[10]。這使研究痙攣肌肉的活動以及拮抗被動活動的被動肌肉結(jié)構(gòu)變化具有了很強(qiáng)的挑戰(zhàn)性和很重要意義。深入研究這個問題是對于進(jìn)行這些障礙在CP患兒的康復(fù)管理至關(guān)重要的，因為肉毒桿菌毒素和重負(fù)荷的功能力量訓(xùn)練這些經(jīng)常使用的康復(fù)措施,增強(qiáng)肌肉力量同時可能起到肌張力

10、的進(jìn)一步增高。
　　持續(xù)痙攣狀態(tài)是腦性癱瘓初級神經(jīng)肌肉損傷的原因[11]，目前仍未研究出肌肉遲緩和肌肉痙攣是腦癱神經(jīng)肌肉障礙的主要原因。本研究以痙攣型腦性癱瘓大鼠作為研究對象，對其周圍神經(jīng)和骨骼肌微觀結(jié)構(gòu)的病理改變進(jìn)行電鏡觀察，結(jié)合對大鼠運動功能的評估，旨在揭示頭皮位點藥物注射對痙攣型腦性癱瘓繼發(fā)的骨骼肌、周圍神經(jīng)的病理改變的治療作用，通過查閱文獻(xiàn)，國內(nèi)外關(guān)于對腦癱大鼠周圍神經(jīng)和骨骼肌病變的電鏡觀察未有涉及。
　　目的

11、>　　本實驗以缺血缺氧引起的痙攣型腦性癱瘓的大鼠模型作為研究對象，以頭皮位點藥物注射為主要干預(yù)措施，通過電鏡觀察實驗動物的周圍神經(jīng)、骨骼肌的病理改變程度結(jié)合對其運動功能評定來研究頭皮位點藥物注射對痙攣型腦性癱瘓的治療作用，以期為臨床治療提供依據(jù)。
　　方法
　　1．通過對200只7d齡SD大鼠幼鼠進(jìn)行雙側(cè)頸總動脈分離，左側(cè)頸總動脈結(jié)扎、右側(cè)頸總動脈用動脈夾夾閉3h，取下動脈夾后，放入充滿含 N2:O2體積分?jǐn)?shù)比為為92:8的

12、氮氧混合氣體的自制缺氧箱中缺氧2.5h，取出，一周后觀察篩選出制作成功的痙攣型腦癱大鼠模型45只。
　　2．將符合痙攣型腦癱條件的大鼠隨機(jī)平均分成3組，每組15只，另隨機(jī)選15只大鼠僅作雙側(cè)頸總動脈分離而不做其他處理作為空白組。依次標(biāo)注為空白組、對照組、位點生理鹽注射水組、位點維生素 B1B12注射組；模型建立第14天，位點維生素B1B12注射組于動物額頂葉頭皮下注射維生素B1B12注射溶液約2ml，隔天一次，共7次，位點生理鹽水

13、注射組給予等量生理鹽水注射，注射方法和頻率相同。四組均給予一定的環(huán)境刺激。
　　3．治療2周結(jié)束后對各組大鼠的一般情況，曠野實驗，斜坡實驗，平衡木實驗和測量步距長進(jìn)行評估，評估結(jié)束后解剖取得比目魚肌、脛神經(jīng)制作電鏡切片，電鏡觀察肌肉、周圍神經(jīng)髓鞘形態(tài)，對比得出病變的程度。
　　結(jié)果
　　1．運動功能評估：（見表1）曠野實驗第一分鐘內(nèi)穿過的方格數(shù)比較，位點維生素B1 B12注射組（12.47±0.48）多于對照組（6.4

14、1±0.30），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ p=0， F=34.37）、斜扳試驗所用時間比較，位點維生素 B1B12注射組（1.58±0.07）少于對照組（3.465±0.09），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p=0.001，F(xiàn)=9.38）、平衡木實驗后肢滑脫次數(shù)比較，位點維生素B1B12注射組（0.59±0.23）少于對照組（4.41±0.34），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p=0.007，F(xiàn)=7.55）、步距長比較，位點維生素 B1 B12注射組（7.62±0.

15、28）大于對照組（4.15±0.27），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.014，F(xiàn)=16.35）。
　　2．電子顯微鏡觀察周圍神經(jīng)髓鞘結(jié)構(gòu)及施旺細(xì)胞胞體結(jié)構(gòu)改變的結(jié)果（見圖1、圖2）：
　　位點注射維生素B1B12組髓鞘形狀規(guī)則，板層排列致密無松解斷裂；施旺細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)無溶解。對照組髓鞘增生，形狀不規(guī)則，板層松解、分層、有斷裂，分層處可見泡狀結(jié)構(gòu)，大小不一。施旺細(xì)胞內(nèi)可見大小不等的空泡狀結(jié)構(gòu)，線粒體大部分嵴和部分膜

16、溶解，模糊不清，嵴有斷裂、缺失，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上附著的核糖體數(shù)量減少。
　　3．電子顯微鏡觀察周圍神經(jīng)髓鞘結(jié)構(gòu)及施旺細(xì)胞胞體結(jié)構(gòu)改變的結(jié)果（見圖3、圖4）：
　　位點注射維生素B1B12組肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，排列規(guī)則，肌細(xì)胞核兩段及肌膜下有大量線粒體和糖原富集。對照組肌肉纖維有溶解，肌纖維內(nèi)線粒體溶解，形成大小不等的空泡狀結(jié)構(gòu)，部分線粒體髓樣化、致密化，線粒體和糖原數(shù)量減少明顯。
　　結(jié)論
　　1．頭皮位點藥物注射治療方