雙納米金復合探針蛋白芯片在心臟標志物檢測中的應用.pdf

1、背景：
　　急性心肌梗死(Acute myocardial infarction，AMI)是冠狀動脈粥樣硬化性心臟病（簡稱冠心?。┑膰乐仡愋停湓\斷主要依靠臨床表現(xiàn)、心電圖改變及心臟標志物的測定。目前，因胸痛或其他不適疑似急性冠脈綜合癥（acute coronary syndrome，ACS）的患者因缺乏典型癥狀，或急救現(xiàn)場缺乏心電圖、實驗室檢測條件等原因，錯失了最佳治療時機，給疾病的診治篩查帶來了眾多不便。及時檢測生物傳感器技術

2、，由于便攜式、低成本、高靈敏、簡便快捷等優(yōu)點目前廣泛應用于心臟標志物的聯(lián)合檢測，在心血管疾病早期診斷中具有廣闊的應用前景。
　　納米金（gold nanoparticles，AuNPs）為直徑介于1nm至100nm的金微小顆粒。因其能夠穩(wěn)定存在于水溶液中，又名膠體金。作為一種新型的納米材料之一，納米金由于具有特殊的物理、化學性質(zhì)廣泛應用于許多領域，包括生物傳感器、免疫分析、基因組學、蛋白質(zhì)及藥物的靶向傳遞、組織和細胞探測系統(tǒng)的光學

3、成像、腫瘤細胞的光熱作用等方面。
　　隨著蛋白質(zhì)組學的提出及研究的不斷深入，蛋白芯片技術應運而生，以實現(xiàn)對蛋白質(zhì)的大規(guī)模分析。蛋白芯片，又名蛋白微陣列芯片（protein chip or protein microarray)，由包被在各種各樣固相基質(zhì)的蛋白微陣列組成，憑借高通量、微型化、高靈敏度和高特異性等特點，廣泛應用于蛋白質(zhì)相互作用譜和表達譜的系統(tǒng)性研究中，為蛋白組學的發(fā)展提供了新的技術方法和研究策略。
　　目的：

4、r>　　為實現(xiàn)AMI的快速、高靈敏、高特異性、聯(lián)合定量檢測，本文構(gòu)建了一種基于雙納米金復合探針蛋白芯片檢測心肌損傷標志物的新方法。
　　方法：
　　本研究構(gòu)建了兩種納米金探針：標記檢測抗體和DNA探針1的檢測探針和標記DNA探針2（與DNA探針1堿基互補配對）的信號探針。當目的抗原存在時，檢測探針經(jīng)檢測抗體、抗原，與芯片上捕獲抗體結(jié)合，固定在芯片上；信號探針通過堿基互補配對與檢測探針結(jié)合使信號放大，最后利用納米金成核原理染色

5、，通過顯微鏡觀察結(jié)果并定量分析，繪制標準曲線；收集2014年03月至12月就診于鄭州大學第二附屬醫(yī)院和鄭州市第一人民醫(yī)院心內(nèi)科的72例住院患者血清，其中不穩(wěn)定性心絞痛(UA)30例，AMI42例，對照組為健康體檢者30例。分別用該方法與臨床電化學發(fā)光法（ECLIA）、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測以上三組患者血清中肌鈣蛋白I(cTnI)、肌紅蛋白（MYO）以及心型脂肪酸結(jié)合蛋白(HFABP)的含量。
　　結(jié)果：
　　該體系

6、40min內(nèi)可檢測多種標志物，其中肌鈣蛋白I(cTnI)檢測限為10 pg/mL，與臨床電化學發(fā)光法（ECLIA）靈敏度相當；肌紅蛋白（MYO）與心型脂肪酸結(jié)合蛋白(HFABP)檢測限分別為640 pg/mL和10 pg/mL，與ECLIA及酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）相比，靈敏度顯著提高。本方法檢測臨床樣本與ECLIA、ELISA結(jié)果總體一致。
　　結(jié)論：
　　該蛋白芯片技術簡便快捷、成本低、可同時高靈敏檢測多種標志物，在