Wif1在肛門(mén)直腸畸形大鼠胚胎發(fā)育中時(shí)空性表達(dá)的研究.pdf

1、目的：
　　本研究將探討Wif1基因在正常及ETU誘導(dǎo)的肛門(mén)直腸畸形(anorectalmalformation，ARM) Wistar大鼠胚胎肛門(mén)直腸發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)模式，并分析其在大鼠ARM的發(fā)生過(guò)程中可能發(fā)揮的作用。
　　方法：
　　將確認(rèn)已經(jīng)受孕的Wistar大鼠隨機(jī)分為兩組:乙烯硫脲(ethylenethiourea，ETU)實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組。在ETU實(shí)驗(yàn)組中，在孕齡(gestational day，GD)10

2、天時(shí)按照125mg/Kg給予大鼠1％ ETU灌胃處理，對(duì)照組給予等劑量的生理鹽水灌胃處理。分別在大鼠GD13-GD16天時(shí)進(jìn)行剖宮取出胚胎，大約一半的胚胎經(jīng)4％多聚甲醛固定12-24小時(shí)，常規(guī)行脫水，石蠟包埋，做成蠟塊標(biāo)本，行4μm厚矢狀面連續(xù)切片，進(jìn)行免疫組化染色。剩余約二分之一胚胎在液氮中冷凍保存，在冰凍切片機(jī)上進(jìn)行連續(xù)矢狀位切片，準(zhǔn)備提取泄殖腔/直腸組織蛋白，進(jìn)行WesternBlot蛋白檢測(cè)。
　　結(jié)果：
　　免疫組

3、化染色結(jié)果顯示，在正常組中，GD13天，Wif1陽(yáng)性細(xì)胞廣泛分布于尿直腸膈上皮、后腸上皮和泄殖腔膜，GD14天，Wif1在尿直腸膈、后腸和泄殖腔膜上大量表達(dá)。GD15天，尿直腸膈與泄殖腔膜的融合部分以及菲薄的肛膜處Wif1表達(dá)陽(yáng)性。GD16天，Wif1陽(yáng)性細(xì)胞分布于肛門(mén)直腸上皮。在畸形組中，GD13和GD14天，尿直腸膈上皮、后腸上皮和泄殖腔膜上均有大量Wif1陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá);GD15和GD16天，泄殖腔上皮，尿直腸膈上皮和肛門(mén)直腸上皮僅

4、有少量Wif1陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)。Western blot結(jié)果顯示，Wif1蛋白的表達(dá)在后腸發(fā)育過(guò)程中呈現(xiàn)時(shí)間依賴性變化，GD13到GD14天逐漸增強(qiáng)，在GD14達(dá)到最強(qiáng)（GD13，0.856±0.053（正常組）vs.0.894±0.020（畸形組），GD14，0.965±0.034（正常組）vs.1.038±0.063（畸形組），P＞0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義），GD15至GD16天逐漸下降。GD15-GD16天時(shí)ARM組Wif1蛋白的表

5、達(dá)水平要明顯低于同時(shí)期正常組(GD15，0.857±0.042(正常組)vs.0.659±0.036（畸形組），GD16，0.640±0.026（正常組）vs.0.294±0.010（畸形組）;P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義）。
　　結(jié)論：
　　1、Wif1在ETU致畸的ARM大鼠胚胎肛門(mén)直腸發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)存在著時(shí)間-空間不均衡性的特點(diǎn)。
　　2、ETU致畸的大鼠胚胎期泄殖腔/后腸發(fā)育過(guò)程中Wif1表達(dá)模式的改變可能