鹽芥ThPER32和ThPER42植物表達(dá)載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)基因研究.pdf

1、摘要lS‘7272過(guò)氧化物酶(Peroxidase，POD，ECl1117)是抗氧化酶中的重要成員之一，在植物體中發(fā)揮了重要作用，與植物的生長(zhǎng)、發(fā)育、逆境耐受、防御過(guò)程有關(guān)，直接參與了細(xì)胞壁的木質(zhì)化和角質(zhì)化、細(xì)胞衰老、生長(zhǎng)素代謝、受傷組織的栓化愈合和對(duì)病原的防御反應(yīng)。其中，在清除ROS(reactiveoxygenspecies)方面過(guò)氧化物酶作用較大。近年來(lái)鹽芥(Thellungiellahalophila)作為鹽生模式植物，研究其抗

2、鹽機(jī)理備受關(guān)注。本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)克隆了鹽芥2個(gè)具有重要作用的編碼POD的基因：ThPER32和ThPER42，并在NCBI上注冊(cè)，注冊(cè)號(hào)分別為EFl95127和EF580925。本研究通過(guò)構(gòu)建真核表達(dá)載體和轉(zhuǎn)基因研究旨在進(jìn)一步探討其功能。結(jié)果如下：1選取表達(dá)載體pPZP212，成功構(gòu)建了組成型表達(dá)啟動(dòng)子CaMV35S控制下的鹽芥過(guò)氧化物酶基因ThPER32與ThPER42的植物表達(dá)載體pPZP212一ThPER32和pPZP212一ThPE

3、R42，并轉(zhuǎn)化根癌農(nóng)桿菌(Agrobacteriummmefaciens)EHAl05。2分別采用蘸花法和葉盤(pán)法通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)將ThPER32與ThPER42轉(zhuǎn)入擬南芥(Arabidops括thaliana)和煙草(Nico巧anatabacum)中。對(duì)轉(zhuǎn)化的擬南芥和煙草進(jìn)行了標(biāo)記基因的抗性篩選。在基因組DNA水平和轉(zhuǎn)錄水平上鑒定并獲得了轉(zhuǎn)ThPER32與ThPER42煙草。3為研究ThPER32和ThPER42在煙草中的過(guò)表達(dá)與抗逆性

4、關(guān)系，采用NaCI(濃度為150mmolL1、300mmolL1)處理野生型煙草和轉(zhuǎn)AbstractPeroxidase(POD，ECl1117)isanimportantmemberofantioxidase，itplaysamajorroleinplantandrelatestoplantgrowth，development，stresstolerance，defenseprocess，directlyinvolvedincellw

5、alllignifationandhornyandcellsenescence，auxinmetabolism，theboltofhealingdamagedtissueandpathogendefenseresponses，which，playalargeroleinclearingROS(reactiveoxygenspecies)aspectsInrecentyears，Thellungiellahalophilaasasaltm

6、odelplanttostudythemechanismofitsconcernaboutsaltTwoimportantgeneswhichcodePODhasbeenclonedfromThellungiellahalophilainthislaboratory：ThPER32andThPER42whichbasedonregisteredintheNCBI(RegistrationmarksareEFl95127andEF5809

7、25differently)ThisresearchaimstofurtherstudiesontheirfunctionsbytransgenieresearchTheresultsareasfollows：1ConstructingconstitutiveexpressionofperoxidasegeneThPER32andThPER42underthecontrolofpromoterCaMV35SpPZP212一ThPER32

8、，pPZP212ThPER42successfully，thentransformedthemintoEHAl05ofAgrobacteriumtumefaciens2ThPER32andThPER42aremediatedbyAgrobacteriumintoArabidopsisthalianaandNicotianatabacumthroughdipingflowerandleafdiscmethodOnthetransforma