蛋白特異性糖基化修飾的標(biāo)記影像以及利用糖鏈為腫瘤細(xì)胞提供免疫治療.pdf

1、糖基化修飾在生物體內(nèi)具有極大的普遍性和重要性，糖基化修飾的蛋白占細(xì)胞內(nèi)蛋白總量超過(guò)了70％，蛋白表面的糖鏈修飾與其結(jié)構(gòu)、功能等均存在密切的關(guān)系。在以前的糖生物學(xué)研究中，較多的關(guān)注于蛋白整體的糖基化水平，而對(duì)于蛋白特異性的糖基化修飾關(guān)注的較少。目前，越來(lái)越多的研究顯示，在生物學(xué)進(jìn)程中，特定蛋白上的特異性糖基化比整體水平的糖基化更具有生物學(xué)意義。然而，如何能夠直接在細(xì)胞水平標(biāo)記特定蛋白的特異性糖基化修飾的技術(shù)手段還有待不斷地開(kāi)發(fā)。因?yàn)檫@存在

2、兩大難點(diǎn):1、相比于磷酸化、乙酰化等蛋白翻譯后修飾，糖基化修飾的糖鏈結(jié)構(gòu)更加的復(fù)雜;2、糖鏈的低免疫原性限制了針對(duì)特定位點(diǎn)糖基化修飾的高效抗體的開(kāi)發(fā)。為了進(jìn)一步克服這些限制，我們利用代謝標(biāo)記和鄰位連接技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用(METPLA)的策略來(lái)標(biāo)記和影像特定蛋白的特異性糖基化修飾。這個(gè)策略中，糖鏈和靶標(biāo)蛋白分別被連接上兩條寡核苷酸，當(dāng)這兩條寡核苷酸的距離＜40nm時(shí)，兩者之間發(fā)生滾環(huán)復(fù)制反應(yīng)，最終使標(biāo)記的熒光達(dá)到在顯微鏡下可見(jiàn)的量，從而影像特定

3、蛋白上的特異性糖基化修飾。我們利用該策略提供了一種新的方法，能夠直接在細(xì)胞水平對(duì)各種不同類(lèi)型的糖基化進(jìn)行影像，并且在細(xì)胞動(dòng)態(tài)變化過(guò)程中檢測(cè)一些細(xì)胞膜受體蛋白的二聚體狀態(tài)。
　　利用機(jī)體的免疫系統(tǒng)去靶向和清除腫瘤細(xì)胞具有特異性和高效性，是一種理想的治療策略。該策略通過(guò)招募人血清中天然存在的抗體到腫瘤細(xì)胞表面，從而引起補(bǔ)體依賴(lài)的細(xì)胞毒性(CDC)、抗體依賴(lài)的細(xì)胞毒性(ADCC)或抗體依賴(lài)的細(xì)胞吞噬(ADCP)去清除腫瘤細(xì)胞。但是這種傳

4、統(tǒng)的方法存在一些固有的缺陷:相比于共價(jià)結(jié)合的方式，配體-受體的非共價(jià)結(jié)合方式相對(duì)較弱并且不穩(wěn)定;另外，腫瘤細(xì)胞表面本身的受體數(shù)量是有限的，這會(huì)導(dǎo)致受體-配體的結(jié)合達(dá)到飽和而導(dǎo)致靶向性的降低;最后，配體-受體的結(jié)合，可能會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞對(duì)結(jié)合在其表面的分子進(jìn)行內(nèi)吞作用，也將導(dǎo)致免疫應(yīng)答效率的下降。對(duì)此，我們提出了一種新型的策略，聯(lián)合糖代謝工程和雙正交化學(xué)反應(yīng)，通過(guò)控制糖鏈代謝的量，從而控制在腫瘤細(xì)胞表面帶上的鼠李糖(Rha)表位的量。腫瘤細(xì)胞表