IL-6在糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松小鼠椎體骨髓基質(zhì)細(xì)胞成骨分化障礙中的作用機(jī)制研究.pdf

1、隨著老齡化社會(huì)的到來及社會(huì)環(huán)境的深刻改變，骨質(zhì)疏松癥越來越成為常見的骨骼系統(tǒng)疾病之一。其主要表現(xiàn)為骨量減少、骨組織微結(jié)構(gòu)改變、骨機(jī)械強(qiáng)度降低直至發(fā)生骨折。由于強(qiáng)大的免疫調(diào)節(jié)作用，糖皮質(zhì)激素被廣泛用于治療各種炎癥和自身免疫性疾病，然而，治療使用糖皮質(zhì)激素往往會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的臨床并發(fā)癥，骨質(zhì)疏松癥甚至骨折就是其中重要的一種。糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松癥是最常見的繼發(fā)性骨質(zhì)疏松癥。
　　胸腰椎椎體骨折是最常見的骨質(zhì)疏松性骨折。除了疼痛，骨質(zhì)疏松性

2、骨折導(dǎo)致的活動(dòng)障礙可進(jìn)一步引起肺部感染、肌肉萎縮、日常生活不能自理及社會(huì)孤立等一系列嚴(yán)重后果。肌肉骨骼系統(tǒng)中，骨質(zhì)形成及礦化是由源于骨髓基質(zhì)細(xì)胞(bone marrowstromal cells，BMSC)的成骨細(xì)胞定向分化的結(jié)果。很多文獻(xiàn)均發(fā)現(xiàn)骨質(zhì)疏松癥患者的BMSC成骨分化是有缺陷的，但其原因至今不明，在本研究中我們?cè)噲D從分子水平探討其中的原因。
　　本實(shí)驗(yàn)首先構(gòu)建糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松小鼠動(dòng)物模型(glucocorticoid

3、 inducedosteoporosis，GIO):使用潑尼松緩釋片皮下埋入4周，骨組織形態(tài)學(xué)分析、骨密度及血清骨代謝指標(biāo)檢測(cè)等方法證實(shí)模型成功構(gòu)建后，自造模成功的小鼠胸腰椎椎體分離BMSC并體外傳代培養(yǎng)，骨形態(tài)發(fā)生蛋白2(BMP2)誘導(dǎo)其向成骨細(xì)胞定向分化。Von Kossa染色法計(jì)數(shù)成骨細(xì)胞克隆數(shù)(CFU-OB)，MTT法比較正常小鼠和骨質(zhì)疏松小鼠BMSC增殖率，定量RT-PCR比較兩組RANKL、OPGmRNA表達(dá)情況，誘導(dǎo)1周及

4、3周時(shí)分別使用堿性磷酸酶(ALP)及茜素紅染色法測(cè)定成骨分化情況，誘導(dǎo)2周時(shí)使用定量RT-PCR比較兩組Runx2、OPN、osteocalcin mRNA表達(dá)情況。通過觀察證實(shí)GIO的BMSC成骨分化障礙。
　　再通過抗體芯片技術(shù)檢測(cè)與骨代謝密切相關(guān)的36個(gè)指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）表達(dá)水平異常增高，并進(jìn)一步對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)體系中加入IL-6中和抗體及慢病毒shRNA感染下調(diào)IL-6表達(dá)后，綜合使

5、用上述檢測(cè)方法探討GIO小鼠椎體BMSC成骨分化障礙的分子機(jī)制。最后使用IL-6中和抗體進(jìn)行小鼠體內(nèi)治療，并檢測(cè)相關(guān)成骨分化指標(biāo)。
　　本實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了GIO小鼠椎體BMSC體外增殖減慢且伴成骨分化障礙，并得出以下
　　結(jié)論:
　　1、GIO小鼠椎體BMSC IL-6過度分泌，且該情況在使用BMP2誘導(dǎo)成骨時(shí)同樣存在;
　　2、IL-6過度分泌是導(dǎo)致GIO小鼠椎體BMSC成骨分化障礙的重要原因;
　　3、IL-