脂肪移植對自然衰老皮膚的作用及其與WNT通路相關(guān)機(jī)制的研究.pdf

1、本文主要從以下幾個部分展開論述：
　　第一部分：SD大鼠皮膚自然衰老模型的建立
　　目的：通過比較4周齡年輕大鼠與18個月齡年老大鼠背部皮膚相關(guān)指標(biāo)的差異性，確定自然衰老大鼠皮膚模型的建立。
　　方法：取4周齡年輕組和18個月齡年老組大鼠背部皮膚組織，分別進(jìn)行組織學(xué)H E染色、Masson染色和EVG染色，觀察皮膚組織學(xué)形態(tài)變化；并應(yīng)用Image-Pro Plus6.0（IPP）專業(yè)圖形分析軟件計算皮膚組織中真皮層厚度

2、、膠原纖維和彈力纖維的相對面積值，并進(jìn)行兩組間比較。測定4周齡年輕組與18個月齡年老組皮膚組織中超氧化物歧化酶（SOD）活力、過氧化脂質(zhì)代謝產(chǎn)物丙二醛（MDA）和皮膚羥脯氨酸（Hyp）的含量。
　　結(jié)果：組織切片染色顯示SD大鼠年老組較年輕組皮膚層厚度變薄，膠原纖維面積和彈力纖維面積均減少，兩組間比較有統(tǒng)計學(xué)差異（n=5 P<0.05）。年老組皮膚組織中SOD和Hyp含量低于年輕組，而過氧化脂質(zhì)代謝產(chǎn)物丙二醛（MDA）含量則是年老

3、組高于年輕組，兩組間差異用描述性統(tǒng)計學(xué)方法分析均值和標(biāo)準(zhǔn)差，具有統(tǒng)計學(xué)意義（n=5 P<0.05）。
　　結(jié)論：4周齡年輕組大鼠皮膚與18月齡的年老組大鼠皮膚存在較大差異，且年老組大鼠皮膚抗氧化能力下降，膠原纖維含量減少、染色變淺，彈力纖維減少、變形，有部分呈斷裂、纏結(jié)，可以作為自然衰老皮膚的實驗動物模型，進(jìn)行后續(xù)實驗操作。
　　第二部分：脂肪移植對自然衰老皮膚的作用及其與WNT通路相關(guān)機(jī)制的研究
　　目的：研究大鼠自

4、體顆粒脂肪皮下注射移植對自然衰老皮膚的作用，并對其可能機(jī)制進(jìn)行探討。
　　方法：將15只18個月齡雌性SD大鼠自體脂肪組織，經(jīng)過顆?；幚砗?，采用自身對照的實驗方法，進(jìn)行自體注射移植在大鼠左側(cè)背部皮下（隨機(jī)選取的一側(cè)），另一側(cè)不做任何處理。在一個月、二個月和三個月時間點(diǎn)，每次取5只老鼠分別切取處理部位皮膚組織和未做處理部位皮膚組織進(jìn)行相關(guān)檢測。將注射處理部位皮膚組織作為實驗組，未做注射處理部位另一側(cè)皮膚作為對照組。一、脂肪移植后對

5、于組織形態(tài)的相關(guān)作用指標(biāo)檢測：1）、分別進(jìn)行實驗組與對照組的組織學(xué)HE染色、Masson染色、EVG染色三種特異性染色切片檢測，檢測其真皮厚度有無改變、膠原纖維和彈力纖維面積的變化情況；2）、利用特異性的化學(xué)方法分別對實驗組與對照組進(jìn)行SOD、MDA和Hyp的檢測，分析脂肪移植后皮膚變化情況；3）、用分子生物學(xué)實驗技術(shù)Western blot和qRT-PCR檢測實驗組與對照組中COL I蛋白與其基因的表達(dá)，從而判斷自體脂肪移植對自然衰老

6、皮膚的促進(jìn)年輕化作用。二、移植后的相關(guān)變化機(jī)制檢測：由分子生物學(xué)實驗技術(shù)Western blot方法檢測SD大鼠皮膚組織中Wnt/β-catenin信號傳導(dǎo)通路中 Wnt3a、β-catenin、TGF-β2三種蛋白的變化情況；并用qRT-PCR方法檢測β-catenin mRNA基因的表達(dá)情況，探討自體脂肪移植對自然衰老皮膚年輕化的作用。
　　結(jié)果：一、檢測的組織形態(tài)和相關(guān)指標(biāo)結(jié)果；1）、所測的真皮厚度，在脂肪移植后實驗組較對照

7、組三個不同時間段，其改變量均有統(tǒng)計學(xué)意義（n=5 P<0.05）；所測的膠原纖維面積值，在脂肪移植后實驗組較對照組一個月和三個月時間段，其改變量有統(tǒng)計學(xué)意義（n=5 P<0.05）；二月時間段膠原纖維面積值，改變量無統(tǒng)計學(xué)意義（n=5 P>0.05）；檢測的彈力纖維面積值，在脂肪移植后實驗組較對照組一個月和二個月時間段，其改變量有統(tǒng)計學(xué)意義（n=5 P<0.05）；三月時間段，其變化無統(tǒng)計學(xué)意義（n=5 P>0.05）；2）、三個不同時

8、間段所測的SOD值升高、MDA值降低的變化結(jié)果，實驗組較對照組檢測值變化量，有統(tǒng)計學(xué)意義（n=5 P<0.05）；三個不同時間段Hyp的檢測結(jié)果，實驗組較對照組檢測值變化量，無統(tǒng)計學(xué)意義（n=5 P>0.05）；3）、WB實驗檢測COL I蛋白，三個不同時間段實驗組較對照組比較，其升高量有統(tǒng)計學(xué)意義（n=5 P<0.05）；qRT-PCR檢測COL I mRNA的表達(dá)值，實驗組較對照組三個不同時間段結(jié)果比較，無統(tǒng)計學(xué)意義（n=5 P>0

9、.05）；二、WB實驗檢測脂肪移植后與其作用機(jī)制相關(guān)的三種蛋白表達(dá)量，實驗組較對照組三個不同時間段結(jié)果比較，均有統(tǒng)計學(xué)意義（n=5 P<0.05）；qRT-PCR方法檢測的β-catenin mRNA基因表達(dá)，三個不同時間段實驗組較對照組比較其升高量，有統(tǒng)計學(xué)意義（n=5 P<0.05）.
　　結(jié)論：自體脂肪組織皮下注射移植后，能改善自然衰老的皮膚組織結(jié)構(gòu)，促進(jìn)膠原蛋白的生成，增強(qiáng)了皮膚的抗氧化能力；其機(jī)制可能是通過Wnt/β-c