歐亞旋覆花總黃酮對D-半乳糖誘導(dǎo)小鼠衰老模型的抗皮膚衰老作用及其機制的研究.pdf

1、第一部分：探索 D-半乳糖誘導(dǎo)的亞急性小鼠衰老模型的最佳濃度
　　目的：探索構(gòu)建D-半乳糖誘導(dǎo)的亞急性衰老模型的最佳濃度。
　　方法：昆明小鼠隨機分為5組（每組5只）：空白對照組、不同劑量D-半乳糖組（125mg/kg、250mg/kg、500mg/kg、1000mg/kg）。空白對照組給予頸背部皮下注射0.3ml生理鹽水，其余組均給予同體積不同劑量D-半乳糖每日1次，連續(xù)8周。檢測細胞周期分布情況；檢測血清超氧化物歧化酶(

2、SOD)活性。
　　結(jié)果：不同劑量D-半乳糖組小鼠SOD活性明顯低于空白對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.01）;500mg/kg D-半乳糖組SOD活性明顯低于125mg/kg D-半乳糖組、250mg/kg D-半乳糖組和1000mg/kg D-半乳糖組（均 P＜0.05）。不同劑量的 D-半乳糖組小鼠阻滯于 G0/G1期的細胞數(shù)量明顯高于空白對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.01）;500mg/kg D-半乳糖組阻滯于G

3、0/G1期的細胞數(shù)量明顯高于125mg/kg D-半乳糖組、250mg/kg D-半乳糖組和1000mg/kg D-半乳糖組（均P＜0.05）。
　　結(jié)論：亞急性小鼠衰老模型建立的最佳濃度為500mg/kg D-半乳糖。
　　第二部分：歐亞旋覆花總黃酮對D-半乳糖致小鼠衰老模型的延緩皮膚衰老作用及其機制的研究
　　目的：歐亞旋覆花是中國傳統(tǒng)草藥，其抗氧化活性與其含有的黃酮類化合物有關(guān)。本實驗?zāi)康氖翘接憵W亞旋覆花總黃酮（

4、IBFTF）對D-半乳糖誘導(dǎo)的皮膚老化小鼠模型的抗衰老作用及其機制。
　　方法：隨機將昆明鼠分成6組（每組10只）：空白對照組、模型組、Vit E組、低、中和高劑量IBFTF組。除空白對照組給予頸背部皮下注射0.3ml生理鹽水，其余組均給于同體積D-半乳糖500mg/kg，每日1次，連續(xù)8周。造模第3周，低、中和高劑量給藥組分別灌服IBFTF0.5ml100 mg/kg、200 mg/kg和400 mg/kg，Vit E組灌服維生

5、素 E100mg/kg,空白對照組和模型組灌服等體積的生理鹽水，持續(xù)6周。測定抗氧化酶活性如超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、過氧化氫酶（CAT）和谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）；檢測皮膚含水量，羥脯氨酸（Hyp）含量、膠原纖維含量和真皮厚度等皮膚組織學(xué)指標(biāo)；檢測細胞周期分布情況；RT-qPCR檢測衰老相關(guān)目的基因（Sirt1、p16、p21和Cyclin D1）的mRNA表達量；Western blot技術(shù)檢測衰老相關(guān)目

6、的蛋白的表達量。
　　結(jié)果：IBFTF組小鼠皮膚組織中SOD、CAT和GSH-Px活力明顯高于模型組（均P<0.05），其MDA含量低于模型組（均P<0.05）；IBFTF組小鼠皮膚含水量較模型組明顯提高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均P<0.01）；IBFTF組小鼠Hyp含量較模型組明顯提高（均P<0.05）；IBFTF組小鼠真皮厚度較模型組明顯提高（均P<0.01）；IBFTF組小鼠皮膚組織中膠原纖維含量較模型組明顯提高（均P<0.01

7、）；IBFTF組小鼠阻滯于G0/G1期的細胞數(shù)量較模型組明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均 P<0.05）；IBFTF組小鼠皮膚組織中Sirt1和 Cyclin D1 mRNA表達量明顯高于模型組（均 P<0.05），而 p16, p21 mRNA表達量明顯低于模型組（均P<0.01）；同模型組相比，IBFTF組小鼠皮膚組織中Sirt1和 Cyclin D1蛋白表達量明顯提高（均 P<0.05），而 p16, p21蛋白表達量明顯降低（均P