Tumstatin轉(zhuǎn)基因巨核細胞在NOD-SCID鼠體內(nèi)產(chǎn)生抗新生血管作用血小板.pdf

1、目的：臨床化療導(dǎo)致血小板減少癥，直接輸注血小板又增加促進腫瘤細胞生長和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險。本研究通過將腫瘤抑素基因tumstatin轉(zhuǎn)導(dǎo)至造血干細胞（HSC） CD34+細胞內(nèi)，體外誘導(dǎo)其生成轉(zhuǎn)基因巨核細胞（MKs），再將其輸注到非肥胖糖尿病/重癥聯(lián)合免疫缺陷（NOD/SCID）鼠體內(nèi)，了解tumstatin轉(zhuǎn)基因MKs在NOD/SCID鼠體內(nèi)抗腫瘤作用。在本研究前期實驗中，我們已經(jīng)成功制備出轉(zhuǎn)基因MKs，本實驗主要是將轉(zhuǎn)基因MKs輸注NOD/

2、SCID小鼠體內(nèi)，檢測和分析其在小鼠體內(nèi)生成血小板情況及其抗新生血管作用。為 tumstatin抗血管生成基因治療惡性實體腫瘤提供依據(jù)。
　　方法：（1）將經(jīng)過體外鑒定的tumstatin轉(zhuǎn)基因巨核細胞注入NOD/SCID鼠體內(nèi)，隨機分為轉(zhuǎn)基因組、非轉(zhuǎn)基因組和對照組;（2）定期取血，通過流式細胞儀分析轉(zhuǎn)基因血小板在NOD/SCID鼠體內(nèi)產(chǎn)生情況；（3）激光共聚焦法檢測血小板的tumstatin表達；（4）內(nèi)皮細胞成管抑制試驗檢測血

3、小板的抗血管生成作用；（5）血小板聚集試驗檢測轉(zhuǎn)基因血小板的聚集功能。
　　結(jié)果：（1）形態(tài)學(xué)分析顯示 tumstatin轉(zhuǎn)基因細胞呈現(xiàn)出典型的巨核細胞形態(tài)；（2）tumstatin轉(zhuǎn)基因巨核細胞輸注NOD/SCID鼠后的第3天，流式細胞儀在小鼠外周血檢測到人血小板；（3）激光共聚焦顯微鏡檢測到在外周血中部分血小板既表達自身vWF蛋白，又表達tumstatin蛋白；（4）內(nèi)皮細胞成管抑制試驗顯示tumstatin轉(zhuǎn)基因血小板可顯著