早期雞胚活性粗提物對(duì)小鼠組織創(chuàng)傷修復(fù)的應(yīng)用研究.pdf

1、本試驗(yàn)旨在研究早期雞胚細(xì)胞活性物代替哺乳動(dòng)物胚胎干細(xì)胞在皮膚損傷修復(fù)方面的臨床應(yīng)用效果。在試驗(yàn)中對(duì)種蛋進(jìn)行孵化，提取早期雞胚細(xì)胞活性物，制備成藥膏應(yīng)用于動(dòng)物創(chuàng)傷試驗(yàn)，并通過同源性比對(duì)得出雞與小鼠在創(chuàng)傷修復(fù)相關(guān)的細(xì)胞生長(zhǎng)因子的蛋白活性成分上具有高度同源性。本試驗(yàn)意義在于探討早期雞胚細(xì)胞活性物的臨床效果，為其在臨床應(yīng)用上提供新的思路和借鑒。
　　1.早期雞胚細(xì)胞的分離及活性物的提取
　　為了確定最佳孵化時(shí)間和條件，本試驗(yàn)采用新鮮

2、種蛋在溫度為37℃，濕度為55％的培養(yǎng)箱中孵化，選取0h，24h，48h，72h的入孵蛋采用藥勺法分離原代細(xì)胞，向提取物滴加瑞氏-吉姆薩染色液。結(jié)果顯示，孵化72h是最佳分離時(shí)間。此期顯微鏡下可見早期的雞胚細(xì)胞形態(tài)較圓，似球形，細(xì)胞較小，核較大。為了確定雞胚活性物的提取方法，本試驗(yàn)將提取的雞胚原代細(xì)胞分別在液氮（-196℃），-80℃，-20℃條件下進(jìn)行反復(fù)凍融3次，并在37℃恒溫水浴鍋進(jìn)行融解。結(jié)果顯示：在液氮、-80℃的條件下觀察凍

3、融后的細(xì)胞其裂解率為分別為87%和85%，差異不顯著，但是相對(duì)于-20℃裂解率70%，有顯著差異。-80℃對(duì)于液氮而言操作簡(jiǎn)便，所以選取-80℃作為反復(fù)凍融條件提取雞胚活性物以備后續(xù)試驗(yàn)用。
　　2.軟膏劑基質(zhì)的確定
　　為了探索O/W型基質(zhì)軟膏的最佳制作配方和工藝，本試驗(yàn)通過對(duì)外觀性狀、耐寒與耐熱性試驗(yàn)、離心試驗(yàn)和pH值測(cè)定，篩選出適宜的乳化劑，經(jīng)正交試驗(yàn)確定最佳處方。最佳配方和工藝為硬脂酸10g，白凡士林5g，羊毛脂1.

4、5g，冰片1.0g，液體石蠟3g為油相，加熱至80℃；另稱取甘油5g，吐溫-805g，三乙醇胺0.7g，尼泊金乙酯0.06g，加蒸餾水調(diào)節(jié)油、水兩相至100g，加熱至85℃；待其完全溶解后，將油相緩慢加入水相中，不停地?cái)嚢柚寥榛耆?；?dāng)基質(zhì)溫度降至40℃左右時(shí)，加入10g提取物。最后在制作的活體動(dòng)物皮膚破損模型上涂抹制備的膏劑進(jìn)行刺激性試驗(yàn)，結(jié)果表明此膏劑對(duì)皮膚無刺激性，可以在動(dòng)物臨床實(shí)驗(yàn)上進(jìn)行應(yīng)用。
　　3.動(dòng)物創(chuàng)傷模型的建立<

5、br>　　為了探索早期雞胚細(xì)胞活性物軟膏對(duì)創(chuàng)傷修復(fù)的作用，構(gòu)建昆明小鼠刀切傷，燙傷和眼部損傷模型，皮膚表面涂抹制備的早期雞胚細(xì)胞活性物軟膏以及眼部滴加早期雞胚細(xì)胞活性提取物。結(jié)果顯示：在燙傷模型中，涂抹軟膏劑的傷口愈合比涂抹紅霉素軟膏組和對(duì)照組愈合快。在12d時(shí)，涂抹早期雞胚細(xì)胞活性物膏劑組的創(chuàng)面面積為0.62cm2，創(chuàng)面愈合率為60.16%，對(duì)照試驗(yàn)組小鼠的創(chuàng)面面積為1.13cm2，創(chuàng)面愈合率為26.50%，差異極顯著（p＜0.01）

6、；在刀切傷口組中，涂抹早期雞胚細(xì)胞活性物膏劑組與涂抹紅霉素軟膏組和空白實(shí)驗(yàn)組比較，其傷口愈合快，第7d時(shí)，涂抹自制膏劑組傷口長(zhǎng)度為1.10cm，紅霉素軟膏組傷口長(zhǎng)度為1.35cm，差異不顯著，但對(duì)照組傷口為1.58cm，愈合情況差異顯著（p＜0.05）；在眼部損傷模型中，滴加早期雞胚細(xì)胞活性物提取液對(duì)小鼠眼部損傷具有修復(fù)作用，可抑制炎癥反應(yīng)，并且具有促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)的作用。本試驗(yàn)通過皮下注射、滴眼和皮膚表面涂抹不同的給藥方式，探究早期雞胚細(xì)