變應性鼻炎外周血CD4+T細胞基因表達譜研究.pdf

1、目的：
　　應用基因芯片技術對變應性鼻炎與非變應性鼻炎患者外周血 CD4+T細胞基因表達譜進行分析，根據(jù)試驗及對照組基因表達譜中各基因探針信號的強弱，篩選出差異基因，在淋巴細胞亞群的基因水平上分析變應性鼻炎的發(fā)病機制，通過芯片表達譜的分析，找出疾病相關基因，或為變應性鼻炎的診治提供新的研究方法及方向。
　　方法：
　　應用免疫磁珠技術分選變應性鼻炎及非變應性鼻炎患者外周血中CD4+ T細胞，通過流式細胞技術對所分選的外

2、周血中CD4+ T細胞純度進行驗證，利用基因芯片技術制備4例正常對照組及4例常年性變應性鼻炎發(fā)病期患者的外周血CD4+T細胞芯片，芯片型號：Affymetrix2.0芯片，對制備的基因芯片表達譜行差異基因篩選，通過表達譜芯片探針信號值強弱，篩選出有顯著差異的上、下調(diào)差異基因，最后對篩選出的差異基因行實時定量PCR方法進行驗證。
　　結(jié)果：
　　對試驗組與對照組外周血中CD4+T細胞表達譜中差異基因進行分析，其中上調(diào)基因145

3、6條，下調(diào)基因1088條，顯著上調(diào)基因 ANPEP（alanyl(membrane) aminopeptidase）、TLR8（toll-like receptor8，TLR8），其功能涉及免疫應答、膜受體結(jié)合活性、信號轉(zhuǎn)導、細胞代謝、受體活化及白細胞移植等途徑；對其信號通路分析，發(fā)現(xiàn) ANPEP、TLR8，涉及 Th1/Th2細胞分化、Toll樣受體活化及 NF-kB信號轉(zhuǎn)導等途徑，在變應性鼻炎的發(fā)病機制中起到重要作用。顯著下調(diào)基因S

4、CH1(Src homology2 domain containing)transforming protein1)和STAT5B（signal transducer and activator of transcription5B）等與 IL-2受體激活有關，抑制免疫應答，從另一方面證實，變應性鼻炎的發(fā)病機制涉及免疫激活等代謝途徑。
　　對顯著上、下調(diào)基因行實時定量 PCR驗證，顯著差異基因?qū)崟r定量 PCR組間 t檢驗結(jié)果示：A

5、NPEP的表達在AR組明顯增高P＝1.44*10-2；TLR8的表達在AR組也明顯增高P＝4.38*10-3；SHC1的表達在AR組則顯著下調(diào)P＝3.01*10-2；STAT5B的表達在AR組也顯著下調(diào)P=8.8*10-3；各基因組間P值均小于0.05,差異有統(tǒng)計學意義結(jié)果。
　　將所挑選的差異表達基因向KEGG數(shù)據(jù)庫的各個條目（term）映射，采用超幾何檢驗將各條目總數(shù)與整個基因組比較，篩選出最顯著的KEGG條目，分析變應性鼻炎

6、患者外周血CD4+T細胞基因表達譜，發(fā)現(xiàn)上調(diào)基因顯著性信號轉(zhuǎn)導途徑19條，下調(diào)基因顯著性信號轉(zhuǎn)導途徑35條，其中主要涉及：PPAR信號轉(zhuǎn)導途徑、細胞色素酶P450介導的外源性化學物質(zhì)代謝、VEGF缺氧與血管生成途徑、SHC基因活化途徑、白介素-4信號通路轉(zhuǎn)導途徑、SHC介導信號轉(zhuǎn)導途徑及ErbB信號轉(zhuǎn)導途徑等信號通路。
　　結(jié)論：
　　變應性鼻炎患者試驗組與對照組外周血CD4+T細胞表達譜中，上調(diào)基因1456條，下調(diào)基因10