中藥坤泰膠囊對小鼠種植窗期子宮內(nèi)膜LIF、EGF和IGF-1表達的影響.pdf

1、背景及目的：
　　隨著社會的發(fā)展、空氣污染的嚴重、生活壓力的增大等諸多原因的影響，不孕不育患者人群正在逐年增多，這一形勢使得輔助生殖技術(shù)（ assisted reproductive technology，ART）逐漸走進了廣大患者的視線，為無數(shù)因為不孕癥而感到煩惱絕望的家庭帶來了福音。ART技術(shù)雖然已經(jīng)問世三十余年，但是至今仍舊受限于臨床妊娠率偏低的問題。據(jù)相關(guān)文獻報道，在應用輔助生殖技術(shù)中的胚胎移植術(shù)（in vitro fer

2、tilization-embryo transfer，IVF-ET）助孕的患者中，失敗的原因中有60％左右是因為子宮內(nèi)膜容受性的降低，因此如何改善子宮內(nèi)膜容受性就成為了提高胚胎著床率及臨床妊娠率的重中之重。子宮內(nèi)膜容受性（endometrial receptivity）是指子宮內(nèi)膜對于胚胎的容受能力。胚胎在不斷發(fā)育過程中，在一個特定時期和子宮內(nèi)膜相互作用，完成著床，在這樣一個非常復雜的過程中，子宮內(nèi)膜對胚胎的接受能力決定了胚胎能否成功著

3、床。子宮內(nèi)膜提供給胚胎著床的時間僅在一個很小的范圍內(nèi)完成。我們稱這一時期為“種植窗期”（implantation window）或“著期窗期”（nidation window）。
　　子宮內(nèi)膜容受性的建立是依靠在多種因子的相互作用下完成的。例如表皮生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子、白介素1、血管內(nèi)皮生長因子、干擾素等。多項研究表明，“著床窗期”子宮內(nèi)膜容受性的建立正是由這些因子的共同作用所完成的。這些細胞因子也普遍被認為是子宮內(nèi)膜容受性的相

4、關(guān)因子。
　　超排卵和控制性超排卵（controlled ovarianhyperstimulation，COH）是ART治療的重要組成部分，然而相關(guān)研究顯示，細胞因子、粘附分子以及超微結(jié)構(gòu)的表達時序性會因為COH的影響而被改變，并進一步對子宮內(nèi)膜的容受性受到影響，使得胚胎發(fā)育和開放著床期的同步性被打破，從而降低了子宮內(nèi)膜容受性，影響了IVF的妊娠率。因此，改善ART治療過程中的子宮內(nèi)膜容受性從而提高妊娠率成為了生殖醫(yī)學領(lǐng)域的重中

5、之重。為了提高子宮內(nèi)膜容受性，國內(nèi)外在藥物研究方面做了大量的工作，目前常用的藥物主要是小劑量阿司匹林（aspirin），芳香化酶抑制劑（aromatase inhibitor）、生長激素（GH）及中藥方劑（如阿膠）等，但是目前這些藥物的應用仍然不能很好的起到完全改善子宮內(nèi)膜容受性的作用，并且關(guān)于阿司匹林及芳香化酶抑制劑是否真的能夠有效的提高胚胎著床率及臨床妊娠率也受到了一定的質(zhì)疑，生長激素受限于過高的價格，中藥試劑有服用不便、病人依從性

6、差等缺點。為了克服以上這些問題，我們需要找到一種安全、方便、便宜的藥物來改善子宮內(nèi)膜容受性。因此，本研究利用小鼠作為研究對象，采用熒光定量PCR法探究坤泰膠囊對超排卵周期、自然周期和控制性超排卵周期中小鼠著床期子宮內(nèi)膜容受性相關(guān)的因子白血病抑制因子(leukaemia inhibitory factor,LIF)、表皮生長因子(epidermal growth factor,EGF)和胰島素樣生長因子-I(insulim-like gr

7、owth factor-I,IGF-1)表達水平的作用機智，探討其可能通過何種機制和原理對改善子宮內(nèi)膜的容受性產(chǎn)生影響，實驗目的是希望能夠為臨床用藥提供更加可靠的理論依據(jù)。
　　材料和方法：
　　將接連2個動情周期都無異常的小鼠標為1-90號，利用隨機數(shù)字表分為6組（每組15只）：A組為對照組。B組為生理鹽水+坤泰膠囊組。C組為超排卵組。D組為超排卵+坤泰膠囊組。E組為控制性超排卵（COH）組。F組為控制性超排卵+坤泰膠囊組

8、。觀察到陰栓的小鼠記為妊娠，妊娠后第4天處死，采用熒光定量PCR法檢測子宮內(nèi)膜中EGF、LIF和IGF-1 RNA的表達并進行定量分析，數(shù)據(jù)處理采用SPSS17.0軟件，組間資料的定量對比使用的是t檢驗；運用單因素分析法對多組間數(shù)據(jù)進行定量對比，運用LSD-t檢驗進行多組間資料的兩兩對比，P值小于0.05為有差異顯著，且差異有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果
　　1.LIF、IGF-1、EGF三種mRNA在對照組和NS+坤泰膠囊組中均

9、呈強陽性表達，在超排卵+坤泰膠囊組和控制性超排卵+坤泰膠囊組中均呈陽性表達，在超排卵組和控制性超排卵組中均呈弱陽性表達。
　　2.超排卵組和控制性超排卵組小鼠種植窗期子宮內(nèi)膜中三種因子 mRNA的表達均顯著低于對照組（P<0.001）。且三者在超排卵組中的表達也明顯低于控制性超排卵組（P<0.05）。
　　3.超排卵+坤泰膠囊組和控制性超排卵+坤泰膠囊組小鼠種植窗期子宮內(nèi)膜中三種因子mRNA的表達量仍明顯低于對照組（P<0.

10、01）。且LIF、EGF因子mRNA在超排卵+坤泰膠囊組中的表達也明顯低于控制性超排卵+坤泰膠囊組（P<0.01）。
　　4.小鼠種植窗期子宮內(nèi)膜中三種因子mRNA在對照組中表達均低于NS+坤泰膠囊組（均P<0.05）。在超排卵組中的表達均低于超排卵+坤泰膠囊組(P<0.05)。在控制性超排卵組中的表達均低于控制性超排卵+坤泰膠囊組（P<0.05）。
　　結(jié)論
　　1.超排卵組和控制性超排卵組小鼠種植窗期子宮內(nèi)膜中三種

11、因子 mRNA表達均顯著低于對照組，說明超排卵和控制性超排卵治療均使小鼠子宮內(nèi)膜容受性受到影響。
　　2.超排卵組小鼠種植窗期子宮內(nèi)膜中LIF、IGF-1、EGF三種因子mRNA表達均明顯低于控制性超排卵組，表明超排卵對小鼠子宮內(nèi)膜的損傷比控制性超排卵更大。
　　3.LIF、IGF-1、EGF三種因子mRNA在生理鹽水+坤泰膠囊組、超排卵+坤泰膠囊組、控制性超排卵+坤泰膠囊組小鼠種植窗期子宮內(nèi)膜中的表達均高于對照組、超排卵組