電針對COH小鼠子宮內(nèi)膜IGF-1信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)控研究.pdf

1、目的：
　　通過查閱不孕癥相關(guān)的中醫(yī)文獻(xiàn)，對女性妊娠的機(jī)理進(jìn)行系統(tǒng)總結(jié)，根據(jù)中醫(yī)文獻(xiàn)中有關(guān)不孕癥的病因試闡明和解釋女性不孕癥發(fā)病的根本原因。探討從培調(diào)腎氣法論治不孕癥的理論基礎(chǔ)，為針灸取穴治療不孕癥提供理論指導(dǎo)。實(shí)驗(yàn)采用控制性超排卵長方案以建立 COH（控制性超排卵）小鼠模型，通過針刺“關(guān)元穴”、“中極穴”、“三陰交穴”，觀察電針對COH模型小鼠妊娠率和平均著床位點(diǎn)數(shù)的影響及其對小鼠子宮內(nèi)膜IGF-1信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)控作用，使針刺更好

2、的應(yīng)用于輔助生殖技術(shù)中,提高胚胎著床率，改善妊娠結(jié)局，并為中醫(yī)藥和針灸治療不孕癥提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　1.理論探討：系統(tǒng)查閱和整理與不孕癥相關(guān)的文獻(xiàn)，理清女性妊娠的機(jī)理，分析中醫(yī)文獻(xiàn)中有關(guān)不孕癥的病因，試闡明不孕癥的根本原因。探討從培調(diào)腎氣法論治不孕癥的機(jī)理，并為針灸取穴提供理論基礎(chǔ)。
　　2.實(shí)驗(yàn)研究：選用 SPF級昆明純種性成熟的雌性小鼠120只和雄性小鼠90只，將雌性小鼠隨機(jī)分為自然周期組和造

3、模組，其中20只小鼠設(shè)為自然周期組，100只小鼠設(shè)為造模組，造模組應(yīng)用控制性超排卵長方案以建立COH模型。造模成功后將造模組100只小鼠分為COH組、電針組、電針+BMS-536924組、電針+LY-294002組、電針+PD-98059組，每一組共20只，每個(gè)組又隨機(jī)均分為供體鼠及受體鼠，每種鼠10只。實(shí)驗(yàn)前1周隨機(jī)結(jié)扎45只雄性鼠，另外45只不做結(jié)扎處理,正常飼養(yǎng)。電針組、電針+BMS-536924組、電針+LY-294002組、電

4、針+PD-98059組在絨促性激素（HCG）注射當(dāng)日即行電針治療，直至取材。注射HCG當(dāng)天將各組供體鼠與正常雄性鼠進(jìn)行合籠，并標(biāo)注見陰道栓的日期，記為孕第一天，于孕第二日14時(shí)取2-細(xì)胞置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；受體鼠與供體鼠同組同步，將雄性結(jié)扎鼠與受體鼠按1：1比例合籠，次晨檢查小鼠陰道栓，逐一標(biāo)記見栓日期，若見陰道栓則為假孕小鼠，即為受體鼠。胚胎培養(yǎng)約第68h后，將供體鼠的胚胎移植至本組同日見陰道栓的受體鼠（假孕小鼠）子宮內(nèi)，胚胎移植時(shí)分別

5、將I
　　GF-1R阻斷劑、PI3K通路阻斷劑、MAPK通路阻斷劑注射到電針+BMS-536924組、電針+LY-294002組、電針+PD-98059組同日見陰栓的受體鼠宮腔內(nèi)。觀察COH模型小鼠妊娠率和平均胚胎著床位點(diǎn)數(shù)的變化；Western bolt法檢測各組小鼠子宮內(nèi)膜IGF-1R蛋白表達(dá)水平；Western bolt法檢測各組小鼠子宮內(nèi)膜IGF-1R、AKT、ERK1/2磷酸化水平的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1

6、.電針對COH模型小鼠妊娠率和平均胚胎著床位點(diǎn)數(shù)的影響：與自然周期組比較，COH組妊娠率明顯降低（P<0.01）；與COH組比較，電針組、電針+LY-294002組、電針+PD-98059組的妊娠率明顯升高（P<0.01），而電針+BMS-536924組與COH組比較妊娠率無明顯改善，差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；與電針組比較,電針+BMS-536924組、電針+LY-294002組和電針+PD-98059組妊娠率都有所降低（P<

7、0.01，P<0.05）。與自然周期組比較，COH組平均胚胎著床位點(diǎn)數(shù)明顯降低（P<0.01）；與COH組比較，電針組、電針+LY-294002組、電針+PD-98059組的平均胚胎著床位點(diǎn)數(shù)明顯升高（P<0.01），而電針+BMS-536924組與COH組比較沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；與電針組比較,電針+BMS-536924組平均胚胎著床位點(diǎn)數(shù)有所降低（P<0.01），而電針+LY-294002組和電針+PD-98059與電針組

8、比較沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　2.電針對COH模型小鼠子宮內(nèi)膜IGF-1R蛋白表達(dá)的影響：與自然周期組比較， COH組小鼠子宮內(nèi)膜 IGF-1R蛋白質(zhì)的表達(dá)明顯降低(P<0.01）；與 COH組比較，電針組、電針+BMS-536924組、電針+LY-294002組和電針+PD-98059組的小鼠子宮內(nèi)膜IGF-1R蛋白質(zhì)的表達(dá)明顯升高(P<0.01）；與電針組比較,電針+BMS-536924組、電針+LY-294002

9、組和電針+PD-98059組小鼠子宮內(nèi)膜IGF-1R蛋白質(zhì)的表達(dá)都有降低（P<0.01）。
　　3.電針對COH模型小鼠子宮內(nèi)膜中IGF-1R、AKT、ERK1/2磷酸化水平的影響：與自然周期組比較，COH組小鼠子宮內(nèi)膜 IGF-1R、AKT和ERK1/2的磷酸化水平明顯降低（P<0.01）；與 COH組比較，電針組、電針+BMS-536924組、電針+LY-294002組和電針+PD-98059組的小鼠子宮內(nèi)膜IGF-1R、AK

10、T和ERK1/2的磷酸化水平明顯升高（P<0.01）；與電針組比較,電針+BMS-536924組、電針+LY-294002組和電針+PD-98059組小鼠子宮內(nèi)膜 IGF-1R、AKT和 ERK1/2的磷酸化水平都有降低（P<0.01）。
　　結(jié)論：
　　1.電針針刺小鼠中極穴、關(guān)元穴、三陰交穴能提高COH模型小鼠的妊娠率和平均著床位點(diǎn)數(shù)。
　　2.電針提高COH模型小鼠的妊娠率和平均著床位點(diǎn)數(shù)可能與改善小鼠子宮內(nèi)膜I

11、GF-1R的蛋白表達(dá)有關(guān)。
　　3.與COH組比較，電針組、電針+BMS-536924組、電針+LY-294002組和電針+PD-98059組的小鼠子宮內(nèi)膜IGF-1R、AKT和ERK1/2的磷酸化水平明顯升高；與電針組比較,電針+BMS-536924組、電針+LY-294002組和電針+PD-98059組小鼠子宮內(nèi)膜IGF-1R、AKT和ERK1/2的磷酸化水平都有降低，提示電針提高COH模型小鼠妊娠率和平均胚胎著床位點(diǎn)數(shù)可能是