加減血癥湯抗腫瘤作用及相關(guān)機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　探討加減血癥湯抗腫瘤作用及相關(guān)機(jī)制。
　　方法:
　　1.應(yīng)用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)測(cè)定加減血癥湯總提物有效成分。
　　2.采用MTT法檢測(cè)加減血癥湯對(duì)體外培養(yǎng)的人胃癌細(xì)胞株SGC-7901不同濃度的增殖能力的抑制作用及其與時(shí)間的相關(guān)性。
　　3.采用AnnexinⅤ/PI熒光雙染法檢測(cè)加減血癥湯對(duì)人胃癌細(xì)胞株SGC-7901細(xì)胞凋亡的影響。
　　4.采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同濃度加減血癥湯對(duì)

2、人胃癌細(xì)胞株SGC-7901細(xì)胞周期的影響。
　　5.通過(guò)雞胚尿囊膜技術(shù)及體外增殖實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證加減血癥湯的抗血管生成作用。
　　6.采用RT-PCR法檢測(cè)SGC-7901細(xì)胞中VEGF、mTOR、PI3K、Akt等相關(guān)基因的表達(dá)變化及其濃度相關(guān)性。
　　7.運(yùn)用Western Blot法檢測(cè)加減血癥湯體外作用于人胃癌細(xì)胞株SGC-7901相關(guān)蛋白表達(dá)的變化及其濃度相關(guān)性。
　　8.建立裸鼠胃癌皮下移植瘤模型，觀察加減

3、血癥湯對(duì)裸鼠胃癌皮下移植瘤的抑制作用，根據(jù)荷瘤裸鼠移植瘤的體積和重量計(jì)算加減血癥湯提取液的抑瘤率;HE染色光鏡觀察腫瘤組織的形態(tài)結(jié)構(gòu);免疫組織化學(xué)法檢測(cè)加減血癥湯提取液對(duì)腫瘤組織抗血管生成相關(guān)分子蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.加減血癥湯提取液主要的化學(xué)成分為:芍藥苷、阿魏酸、桂皮醛、芒柄花素、姜黃素、藁本內(nèi)酯、莪術(shù)醇、熊果酸、齊墩果酸，且醇提液的有效成分明顯高于水提液。
　　2.加減血癥湯對(duì)人胃癌細(xì)胞株SGC-79

4、01增殖能力抑制作用明顯，并且呈現(xiàn)明顯的濃度及時(shí)間相關(guān)性。
　　3.加減血癥湯能顯著誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞SGC-7901的凋亡。
　　4.不同濃度的加減血癥湯提取液干預(yù)人胃癌SGC-7901細(xì)胞生長(zhǎng)48h后，G1期細(xì)胞明顯增多，并且隨著藥物濃度的增加，細(xì)胞比例也隨之增加，具有明顯的劑量依賴性。
　　5.加減血癥湯有明顯抗血管生成作用。
　　6.加減血癥湯可下調(diào)人胃癌SGC-7901細(xì)胞中VEGF、mTOR、PI3K、A

5、kt的mRNA的表達(dá)。
　　7.不同濃度加減血癥湯均對(duì)人胃癌SGC-7901細(xì)胞中VEGF、mTOR、PI3K、Akt蛋白的表達(dá)有下調(diào)作用。
　　8.加減血癥湯對(duì)接種人胃癌SGC-7901細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤的生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用，大、中、小劑量組抑瘤率分別達(dá)到58.98％、45.02％，27.52％。免疫組化顯示加減血癥湯組VEGF、CD31、HIF-1α、PI3K、p-mTOR、p-AKT、COX-2蛋白表達(dá)降低，且隨著

6、劑量的增高，蛋白表達(dá)逐漸下降。
　　結(jié)論:
　　加減血癥湯能明顯抑制人胃癌細(xì)胞株SGC-7901的增殖，并誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞株SGC-7901的凋亡、調(diào)節(jié)細(xì)胞周期;加減血癥湯能下調(diào)入胃癌細(xì)胞株SGC-7901中VEGF、mTOR、PI3K、Akt等相關(guān)基因及蛋白的表達(dá);加減血癥湯可降低接種人胃癌SGC-7901細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤中VEGF、CD31、HIF-1α、PI3K、p-AKT、p-mTOR、COX-2蛋白表達(dá)，且呈劑量相