CD226分子與臨床疾病的關(guān)系及其分子機制.pdf

1、1985年，澳大利亞學者 Burns G教授以混合淋巴細胞培養(yǎng)(Mixed Lymphocyte Culture,MLC)中活化的淋巴細胞作為免疫原免疫小鼠制備抗活化T細胞表面抗原的單克隆抗體(monoclonal antibody，mAb)，篩選得到一株可特異性識別表達于活化T細胞表面膜分子的mAb，將其命名為LeoA1。隨后，發(fā)現(xiàn)LeoA1 mAb識別的分子亦高水平表達在血小板表面，遂將此分子命名為血小板與T細胞活化抗原1(plat

2、elet and T cell activation antigen1，PTA1)。在2000年第七屆國際人類白細胞分化抗原協(xié)作組(HLDA7)大會上，由我室提交的抗PTA1 mAb和由DNAX研究所提交的抗DNAM-1 mAb獲準了新的CD編號-CD226，這是首次以我國實驗室為主要研究單位獲得的新CD分子命名。
　　CD226分子屬于免疫球蛋白超家族成員，胞膜外區(qū)含有2個V樣結(jié)構(gòu)域，分子量約為65kD，主要表達于T細胞、NK細

3、胞、NKT細胞、巨核/血小板譜系、血管內(nèi)皮細胞、B細胞亞群和部分造血干細胞。2003年，人CD226分子的兩種配體鑒定成功，分別是人脊髓灰質(zhì)炎病毒受體(PVR/CD155)和 CD112。CD226分子與其配體的相互作用參與T細胞的分化和活化、NK細胞對腫瘤細胞和病毒感染細胞的殺傷、單核/巨噬細胞與內(nèi)皮細胞的粘附、巨噬細胞的分化和血小板的活化與聚集等，與自身免疫性疾病、移植物抗宿主反應以及病毒感染等疾病關(guān)系密切。
　　我們前期實驗

4、發(fā)現(xiàn)，CD226 mAb LeoA1能夠調(diào)控人MLC培養(yǎng)上清中細胞因子的表達。由于MLC體系是一個多細胞培養(yǎng)體系，而IL-10是一個可以由多種免疫細胞合成和分泌的抑制性細胞因子(如參與固有免疫應答的樹突狀細胞、巨噬細胞、肥大細胞和NK細胞；參與適應性免疫應答的Th1、Th2、Th17、Treg、CD8+T細胞和B細胞)，因此搞清CD226分子影響MLC體系中IL-10分泌的細胞機制十分必要；另一方面，作為具有重要免疫調(diào)節(jié)功能的細胞因子，

5、IL-10在機體免疫應答的各階段以及多個部位調(diào)節(jié)機體的免疫應答強度，進而參與多種疾病的發(fā)生和發(fā)展，因此進一步觀測CD226分子和IL-10在臨床疾病中的作用及其機制有助于深入理解CD226分子的功能。鑒于此，本課題圍繞CD226分子展開研究，獲得了以下的研究結(jié)果：
　　(1)在本實驗室前期發(fā)現(xiàn)CD226 mAb LeoA1可以調(diào)控MLC體系中細胞因子分泌格局的基礎上，我們觀測了LeoA1在MLC體系中上調(diào)IL-10表達的細胞機制，

6、發(fā)現(xiàn)LeoA1作用于MLC體系24 h時，CD4+IL-10+T細胞的比例與對照組相比顯著升高，而CD14+IL-10+細胞、CD19+IL-10+細胞、CD56+CD16+IL-10+細胞、CD11c+HLA-DR+IL-10+細胞與對照組相比無顯著性差異，提示 LeoA1促進CD4+IL-10+T細胞的分化；進一步分別去除PBMC中的單核細胞、CD4+T細胞或B細胞亞群，發(fā)現(xiàn)分別去除單核細胞和CD4+T細胞后，MLC體系中IL-10

7、的表達水平顯著降低，提示單核細胞和CD4+T細胞參與LeoA1促進MLC體系中IL-10的分泌。
　　(2)在應用WT小鼠和Cd226-/-小鼠成功建立小鼠EAE模型的基礎上，我們發(fā)現(xiàn)Cd226-/-小鼠EAE發(fā)病時間比 WT小鼠延遲且EAE嚴重程度減弱；腰髓組織HE染色結(jié)果顯示，Cd226-/-小鼠在EAE發(fā)病高峰期時腰髓組織中炎性細胞的浸潤減少；ELISA檢測血清中細胞因子水平時，發(fā)現(xiàn)Cd226-/-小鼠在EAE發(fā)病高峰期體內(nèi)

8、血清中IL-10表達水平較WT小鼠高。
　　(3)在收集了120名肺癌患者和83名健康志愿者的外周血標本基礎上，我們通過提取全基因組DNA并運用PCR-RFLP方法結(jié)合統(tǒng)計分析研究人群中CD226單核苷酸多態(tài)性位點Gly307Ser(rs763361)與肺癌易感性的關(guān)聯(lián)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在非吸煙組人群中，肺癌人群中TT基因型的比例顯著高于健康對照組，OR值為3.4846，95％CI為1.1932-10.1762，P值為0.0224。女性