Fn14分子與肝癌的臨床病理因素、預(yù)后之間的關(guān)系研究.pdf

1、一、研究背景與目的：
　　 肝細(xì)胞肝癌(簡(jiǎn)稱肝癌，Hepatocellular Carcinoma，HCC)是世界范圍內(nèi)最為高發(fā)的惡性腫瘤之一[1]，在我國(guó)所有的惡性腫瘤死亡率中排第二位[2]，在某些農(nóng)村地區(qū)居第一位。目前全球每年新發(fā)約50-60萬例肝癌，其中約42.5％發(fā)生在我國(guó)。由于肝癌術(shù)后的高復(fù)發(fā)率，目前針對(duì)肝癌的一般治療包括：手術(shù)切除、肝移植等的療效都不甚理想[3]。目前一些蛋白分子和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路被證實(shí)與肝癌病人的預(yù)后相

2、關(guān)。然而肝癌的轉(zhuǎn)移與復(fù)發(fā)的機(jī)制并為完全弄清，尋找能夠預(yù)測(cè)肝癌病人預(yù)后的分子標(biāo)志物還是有必要的。
　　 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)分子14(Fn14)是一個(gè)分子量為14-kDA大小的Ⅰ型跨膜蛋白受體，其基因定位于16號(hào)染色體短臂13區(qū)[4-5]。Fn14蛋白屬于腫瘤壞死因子受體超家族，并且在所有腫瘤壞死因子受體中其胞漿區(qū)最短：只有28個(gè)氨基酸。Fn14和腫瘤壞死因子樣凋亡弱誘導(dǎo)因子(TWEAK)是腫瘤壞死因子超家族的一對(duì)配體-受體。這

3、個(gè)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路介導(dǎo)多種生物學(xué)功能，譬如：促炎癥、促血管生成、促進(jìn)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移和生存等等[6]。Fn14分子缺乏死亡域，但是包含PIEET經(jīng)典的腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子結(jié)合序列(TRAF，tumor necrosis factor receptor associated factors)，該結(jié)合序列能夠通過結(jié)合TRAF-1，2，3和5來招募TRAP接頭蛋白，進(jìn)而激活下游的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，諸如：NF-κB、MAPK和AKT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路[7-9

4、]。越來越多的證據(jù)表明，F(xiàn)n14在多種腫瘤中是高表達(dá)的，例如：乳腺癌[10]、惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤[11]、食管腺癌[12]和胰腺癌[13]，并且Fn14的過表達(dá)與這些腫瘤較差的預(yù)后相關(guān)。有研究表明，在體外實(shí)驗(yàn)中遷移至外圍的神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞其Fn14的表達(dá)要比在中心生長(zhǎng)的腫瘤細(xì)胞高，而且來源于神經(jīng)膠質(zhì)瘤病人瘤體外周的腫瘤細(xì)胞也發(fā)現(xiàn)其Fn14表達(dá)要比瘤體中心的細(xì)胞高。進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)表明，F(xiàn)n14基因促進(jìn)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移與Racl和NF-κB的信

5、號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活有關(guān)[11，14]。Wang等人發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)n14基因在食管腺癌中是與其病程特異性相關(guān)的12個(gè)基因之一，并且Fn14基因量表達(dá)最高[15]。Willis等人報(bào)道，F(xiàn)n14的表達(dá)與乳腺癌的轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)分期、HER2-陽性/ER-陰性成正相關(guān)[10]。體外研究表明，F(xiàn)n14/TWEAK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路能夠通過誘導(dǎo)Bc1-2家族成員的表達(dá)保護(hù)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞避免發(fā)生因細(xì)胞毒性試劑引起的凋亡[16]。該信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路也可以通過上調(diào)MMP-9

6、的表達(dá)來促進(jìn)乳腺癌的轉(zhuǎn)移[17]。
　　 早在2000年就有報(bào)道表明，F(xiàn)n14基因主要在低分化的肝細(xì)胞癌細(xì)胞系中過表達(dá)[24]，進(jìn)一步體外的研究表明，F(xiàn)n14/TWEAK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路能夠促進(jìn)多種肝細(xì)胞癌細(xì)胞系的增殖[18]。最新的體內(nèi)研究表明，在CDE(choline-deficient，ethionine-supplemented)飲食誘導(dǎo)的肝損傷老鼠模型中，F(xiàn)n14/TWEAK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路能夠促進(jìn)肝的祖細(xì)胞(LPC，live

7、r progenitor cell)有絲分裂[19]。以上研究結(jié)果提示，F(xiàn)n14基因可能能夠促進(jìn)肝癌的轉(zhuǎn)移與侵襲，然而Fn14基因在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)水平與其臨床預(yù)后還沒有被報(bào)道。本研究意在探討肝癌病人行手術(shù)切除治療后Fn14基因?qū)ζ漕A(yù)后的影響。
　　 二.研究對(duì)象與方法：
　　 用實(shí)時(shí)定量PCR(RT-PCR)和蛋白免疫印跡法(Western-Blot)檢測(cè)Fn14基因和蛋白在成對(duì)肝癌-癌旁樣本中的表達(dá)情況，進(jìn)一步證實(shí)F

8、n14基因在肝癌和癌旁中的表達(dá)差異。我們進(jìn)一步用由260例伴有不同類型門脈癌栓的肝癌樣本組成的組織芯片進(jìn)行Fn14蛋白的免疫組化染色來探究Fn14蛋白的表達(dá)情況與肝癌的其他臨床病理特征、腫瘤的復(fù)發(fā)和病人的生存期之間的關(guān)系。
　　 三、研究結(jié)果：
　　 與癌旁肝組織相比，F(xiàn)n14基因在肝癌組織中明顯高表達(dá)。Fn14蛋白尤其在伴有AFP水平升高(AFP≥20ng/mL)、腫瘤數(shù)目較多(腫瘤數(shù)目≥2)的肝癌中高表達(dá)。通過對(duì)組織