APE1調(diào)控TGFβ介導(dǎo)人骨肉瘤血管生成的機(jī)制研究.pdf

1、血管生成與腫瘤生長和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，與骨肉瘤患者的總生存期呈負(fù)相關(guān)。雙功能蛋白脫嘌呤/脫嘧啶核酸內(nèi)切酶1(APE1)具有堿基切除和氧化還原功能，并參與腫瘤血管生成，然而其機(jī)制并不明確。我們的前期研究表明，轉(zhuǎn)化生長因子(TGFβ)在APE1缺失的骨肉瘤細(xì)胞中顯著降低。轉(zhuǎn)化生長因子β通過多種包括腫瘤抑制、血管生成、侵襲在內(nèi)的多種途徑促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移。在目前的研究中，我們首先揭示了APE1、TGFβ以及微血管密度(MVD)在骨肉瘤組織標(biāo)本中的兩兩相

2、關(guān)性，同時，TGFβ、腫瘤大小以及微血管密度與研究對象的預(yù)后呈負(fù)相關(guān)。我們發(fā)現(xiàn)，在骨肉瘤細(xì)胞中敲低APE1導(dǎo)致TGFβ表達(dá)下降。此外，基于HUVECs的遷移及管狀形成實(shí)驗(yàn)表明，APE1-siRNA抑制體外血管生成。培養(yǎng)基中TGFβ分泌型蛋白的減少也降低HUVECs中Smad3磷酸化水平。假如外源性的TGFβ純化蛋白可以逆轉(zhuǎn)降低的血管生成功能。在小鼠模型中，siRNA調(diào)控沉默的APE1下調(diào)了TGFβ表達(dá)、腫瘤大小及微血管密度。綜上所述，目

3、前的證據(jù)提示，APE1在人骨肉瘤中通過調(diào)控依賴于TGFβ的通路調(diào)節(jié)血管生成，這對人骨肉瘤治療提供了一個用于抗血管生成治療的新靶點(diǎn)。
　　目的:
　　1.揭示APE1、TGFβ、CD34在骨肉瘤組織中的表達(dá)情況及其與預(yù)后之間的關(guān)系以及APE1與TGFβ在人骨肉瘤中的相互作用關(guān)系
　　2.明確APE1及TGFβ在人骨肉瘤血管生成中的作用
　　方法:
　　1.收集80例病理學(xué)確診的骨肉瘤患者的臨床資料及組織樣本<

4、br>　　2.免疫組化測定人骨肉瘤中APE1、TGFβ和微血管密度(MVD)的表達(dá)
　　3.通過APE1-siRNA轉(zhuǎn)染，WB，RT-PCR測定APE1、TGFβ蛋白及mRNA水平表達(dá)情況，同時測定HUVEC細(xì)胞Smad3/pSmad3的蛋白表達(dá)情況
　　4.通過酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)(ELISA)，遷移和管狀形成實(shí)驗(yàn)測定APE1及TGFβ對血管生成能力的影響
　　5.運(yùn)用SPSS20.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計數(shù)資料用卡方檢驗(yàn)或費(fèi)

5、希爾確切概率法。度量數(shù)據(jù)用t檢驗(yàn)或Kruskal-Wallis檢驗(yàn)。TGFβ陽性和陰性組間總生存用Kaplan-Meier生存檢驗(yàn)比較。Spearman秩相關(guān)系數(shù)分析骨肉瘤組織MVD、APE1和TGFβ表達(dá)相關(guān)性。
　　結(jié)果:
　　1.APE1高表達(dá)與TGβ高表達(dá)與MVD高表達(dá)相關(guān)
　　2.APE1、TGFβ及MVD高表達(dá)較APE1、TGFβ及MVD低表達(dá)的骨肉瘤患者中總生存期短
　　3.APE1-siRNA降低

6、TGFβ蛋白及mRNA水平表達(dá)，同時降低細(xì)胞培養(yǎng)上清中TGFβ的分泌
　　4.較低濃度的TGFβ導(dǎo)致HUVECs中Smad3的磷酸化水平下降
　　結(jié)論:
　　1.APE1、TGFβ和MVD的表達(dá)兩兩之間呈正相關(guān);
　　2.APE1、TGFβ和MVD的表達(dá)與骨肉瘤患者的總生存期呈負(fù)相關(guān);
　　3.TGFβ、腫瘤大小、MVD是骨肉瘤預(yù)后的重要預(yù)測因子，且預(yù)測效力遞減;
　　4.人骨肉瘤中，APE1-siR