Wnt1通過TCF4和PPAR-γ上調(diào)巨噬細(xì)胞CD36表達(dá)和MicroRNA-29a通過靶向QKI促進(jìn)巨噬細(xì)胞SRA的表達(dá).pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分展開論述：
　　論文一:wnt1通過促進(jìn)TCF4和PPAR-γ上調(diào)巨噬細(xì)胞清道夫受體CD36的表達(dá)
　　清道夫受體家族B類成員CD36調(diào)控了巨噬細(xì)胞對(duì)氧化型低密度脂蛋白的吞噬，同時(shí)也在巨噬細(xì)胞的生理活動(dòng)中發(fā)揮了重要作用。但是，CD36在巨噬細(xì)胞中本地表達(dá)的調(diào)控機(jī)制還未明了。
　　目的：
　　本研究主要探索wnt1在巨噬細(xì)胞的生理作用，并深入研究了wnt1調(diào)控巨噬細(xì)胞清道夫受體CD36表達(dá)的分

2、子機(jī)制以及wnt1在單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞分化過程中的表達(dá)機(jī)制。
　　方法：
　　本研究中，我們探討了由單核細(xì)胞加GM-CSF刺激分化而來的巨噬細(xì)胞中wnt1與CD36之間的聯(lián)系。轉(zhuǎn)染wnt1的siRNA或是wnt1過表達(dá)質(zhì)粒，巨噬細(xì)胞中CD36表達(dá)分別呈現(xiàn)下調(diào)或上調(diào)。通過使用β-catenin的抑制劑，轉(zhuǎn)染PPAR-γ的siRNA或TCF4的siRNA，我們證實(shí)了wnt1通過促進(jìn)PPAR-γ和TCF4上調(diào)CD36表達(dá)。免疫共沉

3、淀，染色質(zhì)免疫共沉淀及免疫熒光的方法進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)β-catenin可以和PPAR-γ發(fā)生互作，而PPAR-γ又可以與TCF4在核內(nèi)發(fā)生共定位。同時(shí)，轉(zhuǎn)錄因子pax3在單核向巨噬分化過程中調(diào)控wnt1表達(dá)也通過western blot被證實(shí)。
　　結(jié)果：
　　我們的研究證實(shí)了由單核細(xì)胞加GM-CSF刺激分化而來的巨噬細(xì)胞中，wnt1通過激活PPAR-γ和TCF4轉(zhuǎn)錄因子促進(jìn)了CD36的表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　我們的發(fā)

4、現(xiàn)提示了wnt1通過激活wnt經(jīng)典通路，在巨噬細(xì)胞生理過程中發(fā)揮了重要作用。
　　論文二:MicroRNA-29a通過靶向QKI(quaking)促進(jìn)了單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞分化過程中SRA的表達(dá)
　　在單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞分化過程中，miR-29a和清道夫受體-SRA上調(diào)，而RNA結(jié)合蛋白-QKI下調(diào)。由于巨噬細(xì)胞表達(dá)的SRA受體在動(dòng)脈粥樣硬化疾病中的重要性加上我們之前的工作已發(fā)現(xiàn)miR-29a可以上調(diào)SRA，探討SRA調(diào)控的內(nèi)

5、在機(jī)制顯得尤為重要。已有工作分別聯(lián)系了miR-29a與SRA和QKI同單核-巨噬分化。但三者之間在單核-巨噬分化時(shí)是否存在著相互聯(lián)系還未知曉。
　　目的：
　　深入研究miR-29a上調(diào)SRA的詳細(xì)機(jī)制，進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)單核向巨噬分化過程中，miR-29a，SRA和QKI三者之間的內(nèi)在聯(lián)系。
　　方法：
　　本研究中，我們首先運(yùn)用qRT-PCR和western blot的方法驗(yàn)證了在單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞分化時(shí)miR-29

6、a升高，QKI表達(dá)下降。在巨噬細(xì)胞中分別轉(zhuǎn)染miR-29a的模擬物和抑制物后檢測了QKI的蛋白表達(dá)變化，結(jié)合熒光素酶報(bào)告基因技術(shù)驗(yàn)證了QKI是miR-29a的靶基因。信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)SRAmRNA的3'UTR上存在一個(gè)QKI結(jié)合靶位（QRE區(qū)）。因此我們深入探討了QKI與SRA的關(guān)系。通過在巨噬細(xì)胞中過表達(dá)或敲低QKI，我們發(fā)現(xiàn)QKI在轉(zhuǎn)錄水平上抑制了SRA。借助于熒光素酶報(bào)告基因技術(shù)，我們驗(yàn)證了QKI可以和SRAmRNA上QRE區(qū)直接結(jié)