SIRT2調(diào)控NF-κB去乙?；揎椩趧?chuàng)傷性腦損傷中的作用和機(jī)制研究.pdf

1、研究背景：Sirtuin2(SIRT2)是NAD+依賴的去乙酰化酶Sirtuin家族中的一員。近年來的研究證實(shí)SIRT2抑制可以有效治療神經(jīng)退行性疾病。但是，目前為止，SIRT2在創(chuàng)傷性腦損傷（TBI）中的作用和機(jī)制仍未見報道。我們利用控制性皮層撞擊損傷（CCI）和細(xì)胞牽張損傷模型研究 SIRT2抑制及基因敲除（KO）在TBI中的作用。
　　研究方法：C57Bl/6雄性小鼠隨機(jī)分組后接受CCI或假手術(shù)。SIRT2特異性抑制劑AK-

2、7在損傷前30min經(jīng)腹腔注射給藥。在TBI后1天和3天，利用磁共振成像及稱量法計算腦水腫體積和腦組織含水量。檢測損傷側(cè)腦組織中Evans Blue滲出量和緊密連接蛋白表達(dá)改變來評估血腦屏障（BBB）的完整性。免疫熒光和流式細(xì)胞儀標(biāo)記計數(shù)TBI后激活的小膠質(zhì)細(xì)胞；定量PCR和酶聯(lián)免疫（ELISA）檢測炎癥因子水平；Western blot檢測NF-κB乙?；秃宿D(zhuǎn)移水平，核蛋白電泳遷移實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證乙?；?NF-κB與 DNA結(jié)合特性。Gar

3、cia神經(jīng)評分和疲勞轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)評價小鼠TBI后神經(jīng)功能。為驗(yàn)證SIRT2抑制在TBI中的作用，體內(nèi)和體外水平觀察SIRT2 KO在TBI后神經(jīng)細(xì)胞損傷和神經(jīng)功能上的改變。
　　研究結(jié)果：CCI造成明顯的腦水腫和腦組織水含量增加。SIRT2抑制劑AK-7處理在TBI后1天和3天顯著增加腦水腫體積和腦組織水含量，同時加重3天和7天時神經(jīng)功能障礙。SIRT2抑制后BBB的破壞和基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP-9）表達(dá)及活性增加。AK-7增加體內(nèi)

4、和體外水平TBI導(dǎo)致的小膠質(zhì)細(xì)胞激活。炎癥因子PCR和ELISA結(jié)果也提示SIRT2抑制增加了TBI后促炎癥因子表達(dá)。分子機(jī)制方面，SIRT2抑制增加了NF-κB p65乙酰化和核轉(zhuǎn)移水平，使其與啟動子序列DNA結(jié)合能力得到加強(qiáng)而提高轉(zhuǎn)錄活性，從而上調(diào)p65靶基因包括水通道蛋白4（AQP-4），MMP-9和炎癥因子的表達(dá)。SIRT2基因敲除增加了細(xì)胞牽張損傷導(dǎo)致的神經(jīng)細(xì)胞乳酸脫氫酶（LDH）釋放，和CCI損傷周圍區(qū)神經(jīng)細(xì)胞凋亡，并加重T