活版印刷基因芯片制備系統(tǒng)及相關(guān)技術(shù)研究.pdf

1、生物芯片技術(shù)是繼基因工程（重組 DNA技術(shù)）、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）之后在分子生物學(xué)領(lǐng)域中的又一重大突破。在生物芯片技術(shù)中，發(fā)展最為成熟，研究最為廣泛的是基因芯片技術(shù)?；蛐酒饕袃煞N制備方法：點(diǎn)樣法和原位合成法，點(diǎn)樣法存在著生產(chǎn)成本高、繁瑣的實(shí)驗(yàn)步驟、較低的集成密度等缺點(diǎn)。原位合成法生產(chǎn)速度較快、實(shí)驗(yàn)步驟簡(jiǎn)單、點(diǎn)陣呈指數(shù)遞增以及高靈敏度等優(yōu)點(diǎn)，但是也存在合成序列長(zhǎng)度受限，或者合成試劑受到專利保護(hù)等問題。從今后大規(guī)模、批量化生產(chǎn)及應(yīng)

2、用前景的角度考慮，利用高度自動(dòng)化技術(shù)平臺(tái)、批量化原位合成基因芯片是重要的發(fā)展方向。因此，發(fā)展完善和開發(fā)快捷、成本低廉的DNA陣列原位合成技術(shù)具有重要意義。
　　本論文在已提出的活版印刷原位合成制備基因芯片新方法的基礎(chǔ)上，開展如下幾個(gè)方面的工作：
　　（1）對(duì)于活版印刷原位合成基因芯片自動(dòng)化系統(tǒng)進(jìn)行了初步探討。主要研究和探討了儀器各系統(tǒng)設(shè)計(jì)思路，并對(duì)前后兩種材質(zhì)模板的精度作了較為詳細(xì)的統(tǒng)計(jì)分析。當(dāng)將系統(tǒng)的底盤和模板由聚四氟乙烯

3、改換成不銹鋼后，由于不銹鋼自身較低的延展性使得底盤和模板不易發(fā)生形變，提高了儀器的精度。
　?。?）對(duì)宮頸癌患者和正常婦女進(jìn)行了基因組的提取和靶序列擴(kuò)增；實(shí)驗(yàn)對(duì)常規(guī)的酚/氯仿法加以改進(jìn)，提取血液的DNA；設(shè)計(jì)了 p53第四外顯子的引物，PCR擴(kuò)增，為后續(xù)應(yīng)用研究打下基礎(chǔ)。得到的DNA條帶清晰明亮、整齊，質(zhì)量很好，可直接用于PCR擴(kuò)增反應(yīng)。
　?。?）應(yīng)用檸檬酸鈉還原法、檸檬酸鈉-鞣酸還原法、抗壞血酸還原法、硼氫化鈉還原法制備