白細(xì)胞介素17(IL-17)在衣原體呼吸道感染中的免疫保護(hù)作用及對固有免疫應(yīng)答的影響.pdf

1、目的：
　　IL-17主要由 CD4+T細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，在宿主抗感染、抗腫瘤及自身免疫性疾病中發(fā)揮重要作用，是僑聯(lián)固有免疫和適應(yīng)性免疫的橋梁。本研究利用IL-17基因敲除小鼠首先探討IL-17在胞內(nèi)寄生菌沙眼衣原體呼吸道感染中的免疫保護(hù)作用。固有免疫應(yīng)答是宿主抗感染的第一道防線，我們進(jìn)一步探討IL-17在沙眼衣原體呼吸道感染中對固有免疫應(yīng)答細(xì)胞--中性粒細(xì)胞、NK細(xì)胞及γδT細(xì)胞增殖、活化及功能的影響，為IL-17在沙眼衣原體

2、呼吸道感染中的保護(hù)作用機(jī)制增添新的內(nèi)容。
　　方法：
　　WT(C57BL/6)和IL-17-/-小鼠經(jīng)鼻腔吸入1×103IFU沙眼衣原體小鼠肺炎菌株(Chlamydia muridarum, Cm)建立沙眼衣原體小鼠肺炎模型。通過監(jiān)測WT和IL-17-/-小鼠感染后的體重變化，肺組織衣原體生長和病理學(xué)改變，確定IL-17在Cm呼吸道感染中的作用。為了探討IL-17對宿主抗衣原體固有免疫應(yīng)答的影響，取感染不同時(shí)間點(diǎn)小鼠支氣管

3、灌洗液以及肺組織和脾臟單個(gè)核細(xì)胞懸液，利用流式細(xì)胞術(shù)檢測 WT和 IL-17-/-小鼠肺組織 CD11b+Gr-1+中性粒細(xì)胞、CD3-NK1.1+NK細(xì)胞和 CD3+TCRγδ+T細(xì)胞百分率及絕對細(xì)胞數(shù)，探討 IL-17對固有免疫細(xì)胞增殖的影響；用抗鼠 CD69抗體染色 NK細(xì)胞，探討 IL-17對NK細(xì)胞活化的影響；利用細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色技術(shù)檢測WT和IL-17-/-小鼠肺組織及脾臟NK細(xì)胞和γδT細(xì)胞分泌IFNγ水平，探討IL-1

4、7對NK及γδT細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響；采用RT-PCR技術(shù)檢測兩種小鼠肺組織中性粒細(xì)胞趨化因子IL-6、MIP-2和KC mRNA的表達(dá)，確定IL-17是否通過誘導(dǎo)趨化因子的產(chǎn)生促進(jìn)中性粒細(xì)胞向感染部位的募集。
　　結(jié)果：
　　一定劑量的Cm經(jīng)呼吸道感染誘導(dǎo)小鼠衣原體肺炎，WT小鼠和IL-17-/-小鼠從感染后第3天開始體重明顯下降，WT小鼠在感染后第7天體重降至最低水平，之后逐漸開始回升，而 IL-17-/-小鼠體重持續(xù)

5、下降，從感染的第7天開始與 WT鼠比較有顯著差異；且IL-17-/-小鼠在感染的第7天及第14天肺組織衣原體繁殖及病理損傷均比WT小鼠嚴(yán)重。以上結(jié)果提示，IL-17在Cm呼吸道感染中具有免疫保護(hù)作用。進(jìn)一步我們利用IL-17基因敲除小鼠對IL-17抗衣原體感染免疫保護(hù)作用機(jī)制，尤其IL-17對機(jī)體固有免疫應(yīng)答的細(xì)胞-中性粒細(xì)胞、NK細(xì)胞及γδT細(xì)胞的影響進(jìn)行探討。1.中性粒細(xì)胞：與WT小鼠相比，感染后第3天和第7天，IL-17-/-小鼠

6、支氣管灌洗液、肺組織和脾臟中 CD11b+Gr-1+中性粒細(xì)胞百分率和細(xì)胞總數(shù)均顯著降低(P<0.001,P<0.01, P<0.05)；進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)感染后第7天，IL-17-/-小鼠肺組織中性粒細(xì)胞趨化因子IL-6、MIP-2和KC mRNA水平較WT鼠顯著降低(P<0.05，P<0.001，P<0.001)，提示IL-17可能通過誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞趨化因子(IL-6、MIP-2、KC)的表達(dá)促進(jìn)中性粒細(xì)胞募集到炎癥部位。2.NK細(xì)胞：在感

7、染后第3天和第7天，IL-17-/-小鼠肺組織及脾臟中CD3-NK1.1+NK細(xì)胞增殖、活化分子CD69表達(dá)以及分泌IFNγ水平均顯著低于WT小鼠，這提示IL-17在宿主抗衣原體NK細(xì)胞的增殖、活化以及細(xì)胞因子的產(chǎn)生中發(fā)揮作用。3.γδT細(xì)胞：Cm呼吸道感染后第3天和第7天，IL-17-/-小鼠肺組織及脾臟中CD3+TCRγδ+T細(xì)胞增殖水平及肺組織CD3+TCRγδ+T分泌的IFNγ水平與WT小鼠比較沒有顯著差異。
　　結(jié)論：<