TAT-N15在潰瘍性結(jié)腸炎及炎癥相關(guān)性結(jié)直腸腫瘤中的治療作用及機(jī)制研究.pdf

1、第一部分DSS誘導(dǎo)的潰瘍性結(jié)腸炎模型的構(gòu)建
　　目的：證明DSS誘導(dǎo)的小鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型構(gòu)建成功，同時(shí)證明PIK3R3在潰瘍性結(jié)腸炎中發(fā)揮重要功能。
　　方法：通過(guò)DSS誘導(dǎo)小鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型，檢測(cè)臨床指標(biāo)、病理改變及炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)情況，同時(shí)檢測(cè)PIK3R3在模型中的表達(dá)水平。運(yùn)用免疫組化的方法檢測(cè)潰瘍性結(jié)腸炎臨床標(biāo)本中PIK3R3的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：DSS誘導(dǎo)的模型小鼠體重下降，結(jié)腸縮短；結(jié)腸上皮結(jié)構(gòu)破壞，炎

2、癥細(xì)胞浸潤(rùn)增多；PIK3R3在DSS誘導(dǎo)的潰瘍性結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸及潰瘍性結(jié)腸炎臨床組織標(biāo)本中呈現(xiàn)高表達(dá)。
　　結(jié)論：DSS誘導(dǎo)的潰瘍性結(jié)腸炎模型構(gòu)建成功。PIK3R3在DSS誘導(dǎo)的潰瘍性結(jié)腸炎模型及臨床標(biāo)本中表達(dá)水平升高，PIK3R3在潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病中發(fā)揮重要功能。
　　第二部分TAT-N15在DSS誘導(dǎo)的潰瘍性結(jié)腸炎中的治療作用
　　目的：通過(guò)DSS誘導(dǎo)的潰瘍性結(jié)腸炎小鼠模型，評(píng)估TAT-N15在潰瘍性結(jié)腸炎中的治療

3、作用，并與陰性對(duì)照（對(duì)照多肽）及陽(yáng)性對(duì)照（潑尼松龍）做對(duì)比。
　　方法：檢測(cè)各組小鼠體重情況，結(jié)腸長(zhǎng)度，疾病活動(dòng)指數(shù)；HE染色評(píng)估各組的病理改變并定量評(píng)分；免疫組化Ki-67染色評(píng)估上皮細(xì)胞的損傷情況；運(yùn)用real-time PCR、ELISA及流式CBA法評(píng)估相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)。
　　結(jié)果：TAT-N15能抑制模型中小鼠體重的下降，降低疾病活動(dòng)指數(shù)，緩解小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度的縮短；同時(shí)能改善病理變化和炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)；降低Ki-67

4、指數(shù)；減少促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生。
　　結(jié)論：TAT-N15能有效的降低疾病的臨床指標(biāo)，改善疾病的病理變化，促進(jìn)炎癥的盡快恢復(fù)，減少促炎細(xì)胞因子的表達(dá)。
　　第三部分TAT-N15對(duì)AOM/DSS誘導(dǎo)的炎癥相關(guān)性結(jié)直腸腫瘤的抑制作用
　　目的：證明 TAT-N15能有效的抑制潰瘍性結(jié)腸炎向炎癥相關(guān)性結(jié)直腸腫瘤的惡性轉(zhuǎn)化。
　　方法：通過(guò)構(gòu)建AOM/DSS誘導(dǎo)的炎癥相關(guān)性結(jié)直腸腫瘤模型，給予TAT-N15藥物治療，觀察

5、癌前病變，最終生成腫瘤情況（個(gè)數(shù)、大小、分布及負(fù)荷等），臨床指標(biāo)（潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病率，疾病活動(dòng)指數(shù)，結(jié)腸長(zhǎng)度），病理改變，腫瘤的增殖和凋亡（Ki-67及TUN EL），以及細(xì)胞因子的表達(dá)。
　　結(jié)果：TAT-N15能有效抑制癌前病變，肉眼可見(jiàn)腫瘤減少，HE染色顯示癌前病變減少；最終形成的腫瘤評(píng)估發(fā)現(xiàn)TAT-N15組腫瘤數(shù)量更少，體積更小，荷瘤量更低；臨床指標(biāo)中：潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病率更低，疾病活動(dòng)指數(shù)更低，結(jié)腸長(zhǎng)度更長(zhǎng)；病理改變更輕

6、；腫瘤的增殖更低，凋亡指數(shù)更高；促炎細(xì)胞因子表達(dá)更低，抑炎細(xì)胞因子表達(dá)升高。
　　結(jié)論：TAT-N15能有效的抑制腫瘤的癌前病變，抑制最終炎癥相關(guān)性腫瘤的生成。
　　第四部分TAT-N15抑制潰瘍性結(jié)腸炎的機(jī)制研究
　　目的：驗(yàn)證在動(dòng)物模型中TAT-N15能有效的抑制NF-κB信號(hào)通路；觀察TAT-N15對(duì)緊密連接蛋白ZO-1表達(dá)的影響及對(duì)Treg細(xì)胞表達(dá)的影響。
　　方法：構(gòu)建AOM/DSS誘導(dǎo)的動(dòng)物模型，驗(yàn)證

7、TAT-N15對(duì)p-NF-κB p65表達(dá)的影響；體外LoVo細(xì)胞中證明TAT-N15對(duì)p-NF-κB p65的影響；檢測(cè)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中TAT-N15對(duì)ZO-1表達(dá)的影響，體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中過(guò)表達(dá)及低表達(dá)PIK3R3檢測(cè)ZO-1的表達(dá)變化，LPS誘導(dǎo)的結(jié)腸滲透模型中檢測(cè)TAT-N15對(duì)結(jié)腸滲透能力的影響；動(dòng)物模型中，流式細(xì)胞學(xué)及免疫組化染色檢測(cè)TAT-N15對(duì)Treg細(xì)胞比例的影響。
　　結(jié)果：在AOM/DSS誘導(dǎo)的動(dòng)物模型中，TAT-N

8、15能有效的抑制p-NF-κB p65蛋白及p-STAT3蛋白水平，增加了 ZO-1蛋白的表達(dá)，同時(shí)可升高 Treg細(xì)胞的比例；細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，TAT-N15對(duì) p-NF-κB p65的表達(dá)水平存在時(shí)間及劑量依賴關(guān)系，能有效抑制p-NF-κB p65表達(dá)，對(duì) PIK3R3本身表達(dá)無(wú)影響；LPS誘導(dǎo)的滲透試驗(yàn)中，TAT-N15能降低腸道的滲透能力。
　　結(jié)論：TAT-N15通過(guò)抑制NF-κB通路抑制炎癥，同時(shí)增加腸道緊密連接蛋白的表達(dá)，