中國人群別嘌呤醇致嚴(yán)重皮膚不良反應(yīng)的遺傳標(biāo)志物研究.pdf

1、背景:別嘌呤醇在臨床上廣泛用于痛風(fēng)、高尿酸血癥及其并發(fā)癥等的治療。2004年首次有文獻(xiàn)報(bào)道HLA-B*5801等位基因攜帶與中國臺灣人群別嘌呤醇所致致死性嚴(yán)重皮膚不良反應(yīng)(severe cutaneousadverse reaction，SCAR)強(qiáng)烈相關(guān)，該發(fā)現(xiàn)先后在歐洲、泰國、韓國、日本、葡萄牙、中國香港以及大陸人群中均得到驗(yàn)證。薈萃分析結(jié)果表明，中國人群中HLA-B*5801等位基因攜帶率尤其高，攜帶率約為8.9％。HLA分型由于

2、技術(shù)、成本及基因本身的復(fù)雜性等原因而無法在實(shí)驗(yàn)室普及。近年來基于日本人群的GWAS研究發(fā)現(xiàn)與HLA-B相鄰的PSORS1 C1基因內(nèi)的單核苷酸多態(tài)性(single nucleotidepolymorphism，SNP)rs9263726位點(diǎn)A等位基因與HLA-B*5801呈完全連鎖不平衡，并在小樣本人群建立了對該SNP位點(diǎn)進(jìn)行分型的聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性（PCR-RFLP）法，提示rs9263726在日本人群可能作為別嘌呤醇

3、導(dǎo)致SJS/TEN的替代分子標(biāo)志物。中國人群中rs9263726是否可替代HLA-B*5801作為預(yù)測別嘌呤醇致嚴(yán)重過敏反應(yīng)的預(yù)測因子目前沒有相關(guān)的研究報(bào)道。焦磷酸測序(Pyrosequencing)是一種基于聚合原理的DNA測序方法，是新一代DNA序列分析技術(shù)，且分型方法準(zhǔn)確、快速、簡便、經(jīng)濟(jì)，易于在實(shí)驗(yàn)室普及用作SNP分型。
　　目的:在中國大陸人群中驗(yàn)證HLA-B*5801等位攜帶與別嘌呤醇致嚴(yán)重皮膚不良不良反應(yīng)發(fā)生間的相關(guān)

4、性;探索在中國人群中PSORS1C1 rs9263726(G＞A)A等位基因替代HLA-B*5801作為預(yù)測別嘌呤醇致嚴(yán)重皮膚過敏反應(yīng)發(fā)生的分子標(biāo)記物的可行性;建立可用于對rs9263726位點(diǎn)進(jìn)行分型的焦磷酸測序法。
　　方法:通過多中心回顧性病例-對照研究，收集了來自全國各地17家醫(yī)院別嘌呤醇致嚴(yán)重皮膚不良反應(yīng)患者血液標(biāo)本92例，同時(shí)在廣州、廣西、四川、湖南和山西等地收集連續(xù)或累計(jì)服用別嘌呤醇3個(gè)月以上未出現(xiàn)皮膚不良反應(yīng)（別嘌

5、呤醇耐受組病例）的患者血液標(biāo)本81例，收集長沙地區(qū)健康志愿者外周血標(biāo)本99例。提取DNA后通過直接測序分型法(sequencing based typing，SBT)對所有標(biāo)本進(jìn)行進(jìn)行HLA-B基因分型。Sanger測序法分型對三組人群的PSORS1 C1rs9263726(G＞A)位點(diǎn)進(jìn)行分型，計(jì)算HLA-B*5801和rs9263726(G＞A)位點(diǎn)間的連鎖不平衡強(qiáng)度參數(shù)D'和r2;通過設(shè)計(jì)PCR擴(kuò)增引物和生物素標(biāo)記的測序引物，建立

6、可用于對rs9263726位點(diǎn)進(jìn)行分型的焦磷酸測序分型方法。
　　結(jié)果:本研究收集到92例出現(xiàn)別嘌呤醇所致SCAR的患者，SCAR的具體類型包括伴嗜酸性粒細(xì)胞增多性全身癥狀的藥物反應(yīng)(Drugreaction with eosinophilia and systemic symptoms，DRESS)、史蒂文斯-約翰遜綜合征(Stevens-Johnson syndrome，SJS)和中毒性表皮壞死松解癥（Toxic epider

7、mal necrolysis，TEN）。在92例DRESS/SJS/TEN患者中，有87例患者(87/92，94.57％)攜帶HLA-B*5801等位基因，別嘌呤醇耐受組患者中該等位基因的攜帶率為11.11％(9/81)，HLA-B*5801攜帶增加別嘌呤醇至嚴(yán)重皮膚不良反應(yīng)發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的比值比(odds ratio, OR=139.2,95％CI:44.7-433.9, p=3.02×1028)。84例(91.30％)出現(xiàn)別嘌呤醇所致DR

8、ESS/SJS/TEN的患者攜帶rs9263726 A等位基因，而別嘌呤醇耐受組人群中rs9263726 A等位基因的攜帶率為11.11％，以rs9263726多態(tài)性位點(diǎn)預(yù)測別嘌呤醇致嚴(yán)重皮膚不良反應(yīng)的比值比(OR)為84.0(95％ CI:30.8-229.0，p=4.75×10-26)。99名健康志愿者中rs9263726 A等位基因攜帶者的頻率為14.14％。HLA-B*5801和PSORS1C1 rs9263726(G＞A)多態(tài)

9、位點(diǎn)間呈強(qiáng)連鎖不平衡(D'=0.966，r2=0.902)。HLA-B*5801用于預(yù)測該人群別嘌呤醇SCAR發(fā)生的靈敏度和特異度分別為94.57％和88.89％;陽性預(yù)測值(PPV)和陰性預(yù)測值(NPV)分別為90.61％和93.51％; rs9263726(G＞A)多態(tài)位點(diǎn)A等位基因用于預(yù)測該人群別嘌呤醇致SCAR發(fā)生的靈敏度和特異度分別為91.30％和88.89％;PPV和NPV分別為90.32％和90.00％。將攜帶HLA-B*

10、5801和rs9263726 A等位基因作為診斷指標(biāo)分析ROC曲線下面積AUC分別為0.911和0.895。本研究所建立的rs9263726(G＞A)位點(diǎn)焦磷酸測序分型方法與Sanger測序法所得基因型的一致率達(dá)100％。
　　結(jié)論:1）證實(shí)在中國大陸人群中HLA-B*5801等位基因攜帶與別嘌呤醇所致嚴(yán)重不良反應(yīng)（SJS/TEN/DRESS）的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)強(qiáng)相關(guān);2)中國人群中HLA-B*5801與PSORS1C1 rs926372