SjDLC和SjCB2 DNA疫苗及IFN-γ在日本血吸蟲感染中的保護(hù)性作用.pdf

1、[目的]本實驗通過構(gòu)建血吸蟲核酸疫苗加IFN-γ聯(lián)合免疫小鼠，探討聯(lián)合疫苗pcDNA3.1(-)/SjDLC+pcDNA3.1(+)SjCB2及IFN-γ在日本血吸蟲感染中的免疫保護(hù)性作用。
　　[方法]利用PCR法，獲取SjDLC，mIFN-γ基因，并構(gòu)建pcDNA3.1(-)/SjDLC，pcDNA3.1(+)/m IFN-γ重組質(zhì)粒，雙酶切及測序鑒定。將兩種質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染至Hela細(xì)胞，Western blot鑒定其表達(dá)。BA

2、LB/c小鼠分為7組，分別為：PBS（A組）、pcDNA3.1(+)（B組）、pcDNA3.1(+)/mIFN-γ（C組）、pcDNA3.1(+)/SjCB2（D組）、pcDNA3.1(-)/SjDLC（E組）、pcDNA3.1(+)/SjCB2+pcDNA3.1(-)/SjDLC（F組)、pcDNA3.1(+)/SjCB2+pcDNA3.1(-)/SjDLC+pcDNA3.1(+)/mIFN-γ（G組）。按照分組用核酸疫苗免疫小鼠，每

3、兩周免疫一次，共三次。末次免疫2周后，PCR法和免疫組化法檢測小鼠肌肉中SjDLC，SjCB2，IFN-γ基因及表達(dá)。同時，對各組小鼠用血吸蟲尾蚴進(jìn)行攻擊感染，分別在感染第0w、2w、4w、6w、8w及10w麻醉處死小鼠，收集血液、脾臟和肝臟組織進(jìn)行實驗。HE和Masson染色觀察小鼠肝臟病理變化；流式細(xì)胞術(shù)檢測小鼠肝臟、脾臟Th1和Th2細(xì)胞比例；ELISA檢測IFN-γ、IL-4、IgG、IgE水平。取感染第6w小鼠計算減蟲率、減卵

4、率。
　　[結(jié)果] Western blot顯示SjDLC，IFN-γ能在HeLa細(xì)胞中表達(dá)。核酸疫苗第三次免疫BALB/c小鼠2周后，能從小鼠肌肉組織中擴(kuò)增出SjCB2、SjDLC和mIFN-γ基因及觀察到三個基因的表達(dá)。HE和Masson染色顯示：血吸蟲感染第6w后，蟲卵肉芽腫及纖維化等病變以PBS組（A組）和pcDNA3.1(+)組(B組)最為嚴(yán)重，且隨著感染時間的延長病變加重。C、D、E、F、G組病變程度明顯輕于A、B組，

5、G組病變程度最輕。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示：血吸蟲感染2w～4w，肝、脾組織中Th1細(xì)胞比例均顯著性高于未感染組（0w），P<0.05，于感染第4w達(dá)峰值， C、D、E、F、G組顯著性高于A、B組，P<0.05，以G組Th1比例最高，血吸蟲感染第6w～10w，各組的Th1細(xì)胞比例均顯著性下降，但C、D、E、F、G組仍顯著性高于A、B組，P<0.05，以G組Th1水平最高；血吸感染第6w～10w，各組的Th2細(xì)胞比例均顯著性升高，第8w達(dá)峰值；

6、但C、D、E、F、G組Th2均顯著性低于A、B組，P<0.05，以G組最低。細(xì)胞因子檢測結(jié)果顯示：各組IFN-γ水平與其Th1細(xì)胞比例變化相一致；IL-4水平與Th2比例變化趨勢一致。免疫后各核酸疫苗組IgG顯著性高于A、B、C組，P<0.05，其中以G組抗體水平最高；尾蚴攻擊感染各組小鼠后，IgG抗體在感染第6周達(dá)峰值，與0w組比較，P<0.05，各核酸疫苗組的抗體水平顯著性高于A、B、C組，P<0.05，其中以G組抗體水平最高。Ig