同軸流動(dòng)聚焦法制備攜氧載吲哚菁綠微球用于雙模態(tài)顯像及卵巢癌細(xì)胞治療的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分?jǐn)y氧載吲哚菁綠微球的制備及其性質(zhì)檢測(cè)
　　目的：制備一種攜氧載吲哚菁綠微球并評(píng)價(jià)其特性。
　　方法：采用同軸流動(dòng)聚焦法制備攜氧載吲哚菁綠微球，觀察其形態(tài)和顏色，檢測(cè)其粒徑、粒度分布、光學(xué)性質(zhì)、穩(wěn)定性、釋氧能力、包封率及載藥量。
　　結(jié)果：攜氧載吲哚菁綠微球?yàn)閳A形，大小均勻，呈淡綠色，平均粒徑為(37.5±4.3）μm、包封率為（98.39±1.18）%、載藥量為（0.02±0.005）%，攜氧載吲哚菁綠微球在超

2、聲下具有釋氧能力。與吲哚菁綠水溶液相比，熒光穩(wěn)定性顯著提高。
　　結(jié)論：用同軸流動(dòng)聚焦的方法能成功制備攜氧載吲哚菁綠微球，有望成為卵巢癌的一種新型雙模態(tài)顯影和治療方式。
　　第二部分超聲介導(dǎo)攜氧載吲哚菁綠微球雙模態(tài)顯影的研究
　　目的：觀察超聲介導(dǎo)攜氧載吲哚菁綠微球作為熒光及超聲顯影劑的顯像效果。
　　方法：用低強(qiáng)度聚焦超聲輻照攜氧載吲哚菁綠微球溶液，在顯微鏡下觀察微球相變情況，用超聲顯像儀檢測(cè)相變前后的超聲影像

3、情況，用小動(dòng)物成像儀檢測(cè)攜氧載吲哚菁綠微球的熒光顯像深度，觀察相變前后的熒光顯像，并與同濃度的吲哚菁綠水溶液相比，熒光顯像的變化情況。然后運(yùn)用圖像后處理軟件對(duì)圖像的熒光強(qiáng)度進(jìn)行量化分析。
　　結(jié)果：在超聲參數(shù)為1 MHz，1 W/cm2連續(xù)作用30 s的情況下，攜氧載吲哚菁綠微球相變?yōu)槲⑴?，粒徑增大約6倍，同時(shí)觀察到超聲顯影明顯增強(qiáng)；與吲哚菁綠溶液及激發(fā)后的攜氧載吲哚菁綠微球相比，激發(fā)前的攜氧載吲哚菁綠微球在瓊脂糖凝膠各個(gè)深度的熒

4、光強(qiáng)度都是最強(qiáng)的，且最大深度達(dá)1.5 cm，而攜氧載吲哚菁綠微球在低強(qiáng)度聚焦超聲輻照后，熒光強(qiáng)度變?nèi)?，但仍然顯著高于同濃度下的吲哚菁綠水溶液，吲哚菁綠水溶液的熒光強(qiáng)度最深只有1 cm。
　　結(jié)論：低強(qiáng)度超聲輻照攜氧載吲哚菁綠微球可以致其發(fā)生液氣相變，同時(shí)能夠顯著增強(qiáng)超聲的顯影，攜氧載吲哚菁綠微球能顯著增強(qiáng)熒光的組織穿透性，可用于超聲/熒光雙模態(tài)顯像。
　　第三部分超聲介導(dǎo)攜氧載吲哚菁綠微球?qū)β殉舶┘?xì)胞凋亡和殺傷效應(yīng)的研究

5、r>　　目的：探討超聲介導(dǎo)攜氧載吲哚菁綠微球?qū)β殉舶㏒KOV-3細(xì)胞毒性作用及機(jī)制。
　　方法：用單線態(tài)氧檢測(cè)試劑盒在無(wú)細(xì)胞溶液中檢測(cè)超聲介導(dǎo)對(duì)照組、攜氧載吲哚菁綠微球組和攜氧載吲哚菁綠+疊氮化鈉組的單線態(tài)氧產(chǎn)生情況。采用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SKOV-3細(xì)胞，隨機(jī)分成3組：（1）培養(yǎng)液空白對(duì)照組（對(duì)照組），（2）超聲組（US組），（3）攜氧載吲哚菁綠微球+超聲組（OI-MPs+US組）分別給予相應(yīng)處理，6h后用Hochest33342/P

6、I染色，在顯微鏡下觀察各組的細(xì)胞形態(tài)和凋亡特異性熒光顯像，并用Annexin V-FITC/PI雙染法檢測(cè)各組凋亡情況，24小時(shí)后用MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖抑制率。
　　結(jié)果：與對(duì)照組（16.66±2.89）%和NaN3+OI-MPs+US組(21.30±5.04）%相比，OI-MPs+US組(107.39±8.01）%的單線態(tài)氧產(chǎn)生量顯著增高（P＜0.05）。熒光顯微鏡結(jié)果表明，各處理因素作用6 h后，對(duì)照組顯示淡藍(lán)色熒光，基

7、本沒有紅色熒光，與對(duì)照組相比，US組基本無(wú)明顯變化，而OI-MPs+US組可見大量細(xì)胞皺縮、變圓和明顯的亮藍(lán)色熒光和和紅色熒光。流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示陰性對(duì)照組、US組和OI-MPs+US組的凋亡率分別為（3.10±0.52）%,（5.93±0.94）%和（34.11±3.57）%，OI-MPs+US組的細(xì)胞凋亡率顯著高于對(duì)照組和US組（P＜0.05），各處理組分別作用24小時(shí)后MTT結(jié)果顯示OI-MPs+US組的細(xì)胞存活率為(49.97