載黑色素脂質(zhì)納泡增強(qiáng)超聲-光聲雙模態(tài)顯像實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分載黑色素脂質(zhì)納泡造影劑的制備及其特性研究
　　目的：制備一種載生物內(nèi)源性光吸收子—黑色素的脂質(zhì)納泡造影劑，檢測其基本特性并考察體外超聲/光聲顯像效果。
　　方法：采用乙醚滴定法制備包裹黑色素的脂質(zhì)納米微球，再通過真空冷凍干燥法充入全氟丙烷（C3F8）氣體，制備載黑色素的脂質(zhì)納泡造影劑。檢測其基本形態(tài)、結(jié)構(gòu)，粒徑、表面電位，黑色素含量以及紫外可見光波長范圍內(nèi)的吸收光譜。在體外瓊脂糖凝膠模型中考察其不同濃度的超聲和光聲顯

2、像效果。與MDA-MB-231細(xì)胞孵育，檢測不同時(shí)間內(nèi)（6h，12h，24h）細(xì)胞的活性情況及細(xì)胞對造影劑的吞噬情況。
　　結(jié)果：通過乙醚滴定法成功制備出包裹黑色素的脂質(zhì)納米微球，光鏡下觀察微球形態(tài)規(guī)則，大小分布均勻，平均粒徑為(284.20±85.54)nm，表面電位為(-51.30±5.98)mV。透射電鏡下可見黑色素顆粒較均勻地分布于脂質(zhì)微球內(nèi)。紫外可見分光光度計(jì)測得黑色素的含量為95.10μg/mg。在300nm~800n

3、m波長范圍內(nèi)，均有較強(qiáng)的光吸收能力，隨著波長的增加光吸收值逐漸降低。經(jīng)真空冷凍干燥充入C3F8氣體溶于雙蒸水后，呈棕黑色混懸液，分散性較好。體外超聲顯像，能夠明顯地增強(qiáng)基波及諧波顯影效果，回聲強(qiáng)度隨濃度的增加而增強(qiáng)；在光聲顯像中，具有較強(qiáng)的光聲成像能力，光聲信號(hào)隨濃度增加而增強(qiáng)。臺(tái)盼藍(lán)拒染法測得造影劑對細(xì)胞活性無明顯影響。激光共聚焦顯微鏡觀察，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)見大量經(jīng)DiI標(biāo)記的紅色熒光造影劑聚集。細(xì)胞吞噬造影劑后，進(jìn)行光聲顯像，隨孵育時(shí)間增加

4、，光聲信號(hào)強(qiáng)度呈增強(qiáng)趨勢。
　　結(jié)論：成功制備出性能穩(wěn)定，粒徑較小，大小均勻，分散性較好，生物安全性高的載黑色素的新型脂質(zhì)納泡造影劑，能夠同時(shí)用于超聲、光聲雙模態(tài)顯像，有望成為一種新型的基于超聲顯像的多模態(tài)分子探針。
　　第二部分載黑色素脂質(zhì)納泡造影劑增強(qiáng)腫瘤超聲、光聲成像實(shí)驗(yàn)研究
　　目的：建立裸鼠乳腺癌移植瘤模型，考察并評價(jià)載黑色素脂質(zhì)納泡造影劑體內(nèi)腫瘤超聲、光聲顯像效果。
　　方法：采用乙醚滴定法和真空冷凍

5、干燥法制備載黑色素脂質(zhì)納泡造影劑。建立裸鼠乳腺癌皮下移植瘤模型，經(jīng)尾靜脈注入造影劑后，動(dòng)態(tài)觀察腫瘤模型實(shí)質(zhì)內(nèi)超聲及光聲顯像強(qiáng)化情況，應(yīng)用DFY型超聲圖像定量分析診斷儀和Vevo LAZR軟件對腫瘤興趣區(qū)超聲及光聲信號(hào)進(jìn)行定量分析，評價(jià)其顯像效果。注射造影劑（經(jīng)DiI標(biāo)記）2h后，采集標(biāo)本，行快速冰凍切片，激光共聚焦顯微鏡觀察造影劑在腫瘤組織中聚集效果。
　　結(jié)果：成功制備了載黑色素脂質(zhì)納泡造影劑，在裸鼠移植瘤模型中，經(jīng)尾靜脈注射造

6、影劑后，超聲諧波信號(hào)及光聲信號(hào)得到較明顯地增強(qiáng)；在超聲造影實(shí)驗(yàn)中，注射造影劑15 s后回聲信號(hào)達(dá)到峰值，然后逐漸降低，大約12min后回聲信號(hào)基本消失；在光聲顯像實(shí)驗(yàn)中，注射造影劑后30 min內(nèi)光聲信號(hào)強(qiáng)化較弱，而后明顯增強(qiáng)，大約3h后光聲信號(hào)達(dá)到峰值。激光共聚焦顯微鏡顯示，腫瘤組織間隙內(nèi)見大量的DiI標(biāo)記的紅色熒光造影劑聚集。
　　結(jié)論：載黑色素脂質(zhì)納泡造影劑具有增強(qiáng)體內(nèi)超聲及光聲顯像能力，能夠透過腫瘤新生毛細(xì)血管內(nèi)皮間隙，具