深低溫凍存胃癌樣本的核酸與蛋白質(zhì)質(zhì)量控制研究.pdf

1、目的：腫瘤生物樣本庫建設(shè)已經(jīng)成為各大醫(yī)療中心、行業(yè)協(xié)會(huì)非常關(guān)注的項(xiàng)目，我國生物樣本庫起步較早，部分樣本庫中低溫庫存樣本超過10年已不罕見。為了為規(guī)范性生物樣本收集、儲(chǔ)存與利用提供科學(xué)依據(jù)，本文報(bào)道了上海瑞金醫(yī)院胃腸腫瘤生物樣本庫庫存不同年限（0~10年以上）胃癌生物樣本的核酸與蛋白質(zhì)的質(zhì)量控制分析報(bào)告。并選擇分子生物學(xué)常用基因或已報(bào)道在腫瘤中呈高表達(dá)基因作為候選因子，分析這些候選基因的核酸與蛋白質(zhì)表達(dá)狀況，以期為高質(zhì)量生物樣本庫建設(shè)以及

2、腫瘤轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究提供參考。
　　材料與方法：隨機(jī)抽取瑞金醫(yī)院胃腸腫瘤樣本庫中2003年至2014年間庫存手術(shù)切除胃癌標(biāo)本24對(duì)共48份。通過1％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA與RNA純度及完整性，RNA完整性檢測(cè)增加了RIN值評(píng)估法；采用 BCA法檢測(cè)樣本蛋白質(zhì)濃度，考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白質(zhì)分子的完整性。采用Realtime-PCR檢測(cè)組織中UBE2C/UBCH10的表達(dá)情況；從活性水平驗(yàn)證蛋白質(zhì)的GAPDH、β-ACTIN和 UBE2C

3、/UBCH10的表達(dá)情況，并比較其活性差異。
　　結(jié)果：我們將組織標(biāo)本按年限分成四組，分別為<2年、3-5年、6-8年、>9年進(jìn)行比較分析，樣本DNA完整性各組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），但正常胃組織的DNA降解程度比胃癌組織重（P=0.023）；比較四組之間RIN值顯示，低溫凍存>9年組RIN值比6-8年組和<2年組均有明顯下降（P＝0.00），保存6-8年組比<2年組也有明顯下降（P＝0.018）；各組織間在蛋白質(zhì)濃度上

4、沒有顯著差異，但在考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白質(zhì)分子條帶上存在顯著差異，凍存超過9年組僅有低分子量（平均36.5KD）少量條帶，凍存6-8年組在中等分子量處（平均值65.63KD）可見條帶，凍存3-5年組在高分子量（平均127.5KD）可見條帶，凍存短于2年組在最大分子量指示劑處（平均值160KD）仍可見條帶。候選基因UBE2C/UBCH10在RNA及蛋白表達(dá)上，凍存5年以上組較5年以內(nèi)組均有所下降（P<0.05，P=0.00）；β-ACTIN