黑果枸杞多酚的組成、抗氧化活性及指紋圖譜研究.pdf

1、黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr.)是近年來新發(fā)掘的野生資源，富含花色苷等多酚類功效成分。我國西北地區(qū)的新疆、青海、寧夏、甘肅等省區(qū)是黑果枸杞的主要分布區(qū)域，這些分布區(qū)域生態(tài)條件差異很大。但目前關(guān)于不同生態(tài)環(huán)境條件和不同基因型的黑果枸杞花色苷等多酚的研究報(bào)道鮮見，關(guān)于黑果枸杞花色苷等多酚各化學(xué)組分與活性的相關(guān)性尚不明確。本研究以枸杞不同組織、常見富含花色苷果蔬為對(duì)比，較為系統(tǒng)地探討了黑果枸杞主要化學(xué)成分及體外抗氧化

2、活性，包括對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)效果;利用高效液相色譜(HPLC)、高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(HPLC-MS)、制備色譜、質(zhì)譜(MS)等手段，分離、鑒定花色苷等多酚化合物;分析比較了黑果枸杞花色苷與其它常見果蔬花色苷的組成和對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)效果的差異性;采用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)2004A版，建立不同產(chǎn)地來源、不同種質(zhì)材料黑果枸杞多酚HPLC化學(xué)指紋圖譜，采用中藥材指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)(2004A)、系統(tǒng)聚類分

3、析(HCA)、主成分分析(PCA)解析所建指紋圖譜，探討產(chǎn)地、種質(zhì)材料對(duì)黑果枸杞多酚類物質(zhì)組成、含量的影響;通過體外構(gòu)建5種抗氧化模型觀察黑果枸杞多酚提取物的抗氧化活性的差異性，采用HCA、PLSR法等分析方法，分析黑果枸杞多酚體外抗氧化“譜-效”關(guān)系，探討其各化學(xué)組分與活性的相關(guān)性。為黑果枸杞優(yōu)質(zhì)品種的選育、栽培、質(zhì)量評(píng)價(jià)等積累科學(xué)數(shù)據(jù)和資料。主要研究結(jié)果如下:
　　1.黑果枸杞主要化學(xué)成分及體外抗氧化活性研究
　　以枸杞

4、、枸杞花、葉、枸杞花粉為參照，系統(tǒng)地測(cè)定分析了同一產(chǎn)地（寧夏銀川園林場(chǎng)）黑果枸杞的主要化學(xué)成分及體外抗氧化活性。結(jié)果表明，營養(yǎng)成分豐富、體外抗氧化活性較強(qiáng)，具備開發(fā)利用的價(jià)值。
　　每100 g黑果干果中，含有總糖、總蛋白、總脂肪、總氨基酸及Vc、VE分別為42.64g、11.26g、5.10g、196.12 mg、2.13 mg。黑果枸杞的總多不飽和脂肪酸和總單不飽和酸占到了總脂肪的63.52％和16.69％。與枸杞及其其它組織

5、比較，黑果枸杞富含有礦物元素Fe(405 mg/kg)、花色苷類(2.97 g/100 g)多酚類物質(zhì);黑果枸杞酸性乙醇提取物具有較強(qiáng)的體外抗氧化活性，且總花色苷含量、總多酚含量與抗氧化活性均呈正相關(guān)性，總酚含量與抗氧化活性的相關(guān)性大于總花色苷含量的相關(guān)性。
　　2.黑果枸杞與常見果蔬的花色苷類多酚的組成及對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)效果功效比較研究
　　采用HPLC等分析方法、初步比較并評(píng)價(jià)了黑果枸杞等6種不同花色苷來源植

6、物材料的花色苷組成、含量及體外抗氧化活性，結(jié)果表明:較5種花色苷含量較高的天然果蔬材料，黑果枸杞總花色苷含量最高，分別是是葡萄、樹莓、紫甘藍(lán)、藍(lán)莓和紫薯的10.72、4.91、1.91、1.75、4.45倍;從幾種不同的果蔬花色苷HPLC指紋圖譜可知，黑果枸杞中花色苷主要組分與所測(cè)其它果蔬的花色苷主要組分保留時(shí)間不同，峰面積差異很大，即其花色苷組分種類和含量都有別于其它果蔬花色苷構(gòu)成;體外細(xì)胞氧化損傷保護(hù)試驗(yàn)結(jié)果表明，黑果枸杞花色苷提取

7、物血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷保護(hù)功效顯著高于其它受試果蔬花色苷，表明其具有很好的抗氧化活性，可作為較好的開發(fā)功能性食品的資源。
　　3.黑果枸杞多酚的分離純化及結(jié)構(gòu)分析
　　通過HPLC-ESI-MS分析，從黑果枸杞中分離鑒定出13個(gè)多酚類化合物。其中7個(gè)為?；惢ㄉ眨?個(gè)為非花色苷類化合物。其中，一個(gè)花色苷、4個(gè)柚皮素衍生物和2個(gè)5，7-二羥基黃酮衍生物為首次從黑果枸杞中被鑒定。矮牽牛素-3-O-蕓香糖（順式p-香豆酰）-5-

8、O-葡萄糖苷為黑果枸杞的主要花色苷。以富含花色苷的黑果枸杞為原料，選用大孔樹脂XAD-8、SephadexLH-20分離純化得到的純度為HPLC級(jí)89.66％。由半制備高效液相色譜，對(duì)其再次進(jìn)行純化得到黑果枸杞花色苷主要組分的一個(gè)單體。該單體經(jīng)ESI-MS分析，結(jié)果表明主要分離組分的MS數(shù)據(jù)分別與HPLC-MS分析的矮牽牛素-3-O-蕓香糖（順式p-香豆酰）-5-O-葡萄糖苷的MS數(shù)據(jù)一致。
　　4.不同產(chǎn)地黑果枸杞多酚HPLC指

9、紋圖譜研究
　　建立了26份不同產(chǎn)地的黑果枸杞材料的多酚HPLC指紋圖譜，對(duì)所建圖譜進(jìn)行了分析，得到如下結(jié)果:1）所測(cè)黑果枸杞樣本中均含有大量的酚類物質(zhì)，其含量在不同產(chǎn)地的材料間存在顯著差異，其中青海格爾木烏圖美仁、新疆甘河子、新疆巴侖臺(tái)鎮(zhèn)、寧夏賀蘭12-01等產(chǎn)地的黑果枸杞總酚、總黃酮及總花色苷含量較高;2）在所有供試黑果枸杞不同產(chǎn)地的材料中共檢測(cè)到12種共有酚類化合物，其中，飛燕草素-3-O-蕓香糖苷（順式p-香豆酰）-5-O

10、-葡萄糖苷在所有供試黑果枸杞材料中的多酚及花色苷的主要成分;3）采用藥典委員會(huì)推薦的指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)分析，各產(chǎn)地黑果枸杞多酚HPLC特征圖譜很相似，多數(shù)質(zhì)量均較好，有個(gè)別質(zhì)量較差的情況存在;4）采用HCA法，根據(jù)不同多酚指標(biāo)，可將這26份黑果枸杞資源大體均分為7類，聚類參數(shù)不同，聚類結(jié)果略有差異，即不同來源的野生黑果枸杞在多酚組成上有一定差異;5）采用PCA分析圖譜結(jié)果表明，5，7-二羥基黃酮-衍生物類化合物、柚皮素、飛燕草素-3

11、-O-蕓香糖苷（順式p-香豆酰）-5-O-葡萄糖苷、矮牽牛素-3-O-蕓香糖（順式p-香豆酰）-5-O-葡萄糖苷幾個(gè)化合物可能是決定黑果枸杞不同產(chǎn)地來源的材料之間多酚含量質(zhì)量差異的主要化合物指標(biāo)。
　　5.黑果枸杞不同種質(zhì)材料多酚HPLC指紋圖譜研究
　　建立了17份黑果枸杞種質(zhì)材料的多酚HPLC指紋圖譜，對(duì)所建圖譜進(jìn)行了分析，得到如下結(jié)果:1）這些黑果枸杞資源中含有大量的酚類物質(zhì)，其含量在不同種質(zhì)材料間存在顯著差異，其中材

12、料編號(hào)為9、10、11號(hào)的黑果枸杞總酚、總黃酮及總花色苷含量較高。2）在所有供試黑果枸杞種質(zhì)材料中共檢到8種共有酚類化合物，其中矮牽牛素-3-O-蕓香糖（順式-p-香豆酰）-5-O-葡萄糖苷在所有供試黑果枸杞資源材料中的含量均最高。是黑果枸杞多酚及花色苷的主要成分;3）采用藥典委員會(huì)推薦的指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)分析，17份材料相似度介于0.325-1之間，組成差異較大;4）根據(jù)不同多酚指標(biāo)，可將這17份黑果枸杞資源大體均分為6類，聚類參

13、數(shù)不同，聚類結(jié)果略有差異;5）采用PCA分析圖譜表明，5，7-二羥基黃酮-衍生物類化合物、柚皮素、矮牽牛素-3-O-蕓香糖（順式-p-香豆酰）-5-O-葡萄糖苷及幾個(gè)未知化合物可能是決定黑果枸杞不同種質(zhì)材料之間多酚含量質(zhì)量差異的主要指標(biāo)。
　　6.黑果枸杞多酚體外抗氧化譜效關(guān)系研究
　　采用FRAP值、·OH清除力、DPPH自由基清除力、還原力和總抗氧化能力(TEAC)5個(gè)體外抗氧化指標(biāo)對(duì)黑果枸杞26個(gè)不同產(chǎn)地的黑果枸杞多酚

14、進(jìn)行抗氧化活性評(píng)價(jià)。結(jié)果表明，產(chǎn)地間樣本抗氧化活性差異較大。抗氧化模型不同，其抗氧化活性存在差異。綜合分析，寧夏賀蘭12-01、青海德令哈、新疆巴輪臺(tái)鎮(zhèn)、新疆高泉、甘肅民勤中渠等產(chǎn)地的活性較高;采用PLSR將各抗氧化指標(biāo)與黑果枸杞多酚的關(guān)系進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果表明，多酚含量對(duì)抗氧化活性的影響最大，其后依次是其主要成分矮牽牛素-3-O-蕓香糖（順式-p-香豆酰）-5-O-葡萄糖苷含量、總花色苷含量、總黃酮含量，權(quán)重系數(shù)分別為2.243、1