超聲輔助提取東北黑蜂蜂膠活性成分及其指紋圖譜研究.pdf

1、蜂膠是蜜蜂從不同的植物收集的一種樹脂蜂巢產(chǎn)品，其主要的活性成分有黃酮類、萜烯、酚酸及其衍生物類等，它具有抑菌、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)和降血糖等生物活性。東北黑蜂具有很強(qiáng)的抗凍性，零下兒十度可以安全越冬，但是關(guān)于黑蜂蜂膠有效成分及其活性功能的研究工作較少。本文以抗氧化活性和抑菌活性為指標(biāo)，進(jìn)行了東北黑蜂蜂膠活性物質(zhì)的極性篩選;研究了活性物質(zhì)的超聲輔助提取技術(shù)及其溶出動(dòng)力學(xué)模型;采用掃描電鏡、紫外、紅外、GC-MS和LC-MS等分析方法對(duì)提取物進(jìn)

2、行了微觀結(jié)構(gòu)表征和指紋圖譜分析。
　　主要研究工作及其結(jié)論如下:
　　(1)東北黑蜂蜂膠抗氧化和抑菌活性物質(zhì)的極性篩選:采用甲醇、乙醇、水、乙酸乙酯、苯和三氯甲烷等不同極性的溶劑萃取東北黑蜂蜂膠中的活性物質(zhì)，研究了其活性成分存在的極性范圍。研究結(jié)果表明，東北黑蜂蜂膠不同溶劑的萃取物均具有一定的抗氧化活性，其中甲醇提取物(ME)和乙醇提取物(EE)的抗氧化活性更最強(qiáng);不同極性的提取物對(duì)除大腸桿菌以外的其它試驗(yàn)菌（金黃色葡萄球菌

3、、枯草芽孢桿菌、李斯特菌）均具有抑制生長(zhǎng)的作用，且甲醇和乙醇提取物的抑菌性最強(qiáng)。通過(guò)上述生物活性的測(cè)定，確定乙醇為東北黑蜂蜂膠活性成分提取的最佳溶劑。
　　(2)東北黑蜂蜂膠活性組分的單頻逆流超聲輔助提取:以黃酮和三萜總提取率為指標(biāo)，研究了乙醇濃度、提取溫度、超聲時(shí)間、占空比和液料比對(duì)黃酮和三萜總提取率的影響。結(jié)果表明，液料比、提取溫度、提取時(shí)間和占空比四個(gè)因素對(duì)目標(biāo)提取物的提取效果影響較為顯著。根據(jù)單因素試驗(yàn)方差分析結(jié)果，采用響

4、應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與分析方法得到了東北黑蜂蜂膠主要活性成分最優(yōu)提取條件為:乙醇濃度80％，液料比32∶1 mL/g、提取溫度53℃、提取時(shí)間16 min、占空比10 s/5 s，在此條件下黃酮和三萜的提取率為61.11％，比不加超聲的黃酮和三萜提取率提高了24％。
　　(3)東北黑蜂蜂膠活性組分在超聲場(chǎng)下溶出動(dòng)力學(xué)模型:對(duì)東北黑蜂蜂膠中黃酮和三萜的單頻逆流脈沖超聲輔助提取過(guò)程用二級(jí)動(dòng)力學(xué)模型進(jìn)行擬合發(fā)現(xiàn)，擬合度高，可以用于模擬、預(yù)測(cè)蜂膠

5、中黃酮和三萜的逆流脈沖超聲輔助同時(shí)提取過(guò)程與提取效果。
　　(4)東北黑蜂蜂膠醇提物指紋圖譜的分析:通過(guò)對(duì)東北黑蜂蜂膠提取物進(jìn)行電鏡、紅外和紫外光譜表征，確定了東北黑蜂蜂膠提取物的特征峰。東北黑峰蜂膠乙醇提取物在紫外區(qū)有2個(gè)吸收峰，在292 nm下有一個(gè)最強(qiáng)吸收峰，在356nm有一個(gè)很弱的吸收峰，推斷可能是異黃酮、二氫黃酮及二氫黃酮醇類化合物。蜂膠提取物的紅外光譜圖上有15個(gè)特征峰，分別推斷為烷烴類化合物、萜烯類化合物、黃酮類化合