雞源益生菌BL-Y-1菌株分離鑒定、發(fā)酵條件及其耐受性研究.pdf

1、因抗生素濫用而導(dǎo)致的毒性殘留、耐藥性等問題己引起人們的廣泛關(guān)注。尋找安全、無毒的替代品迫在眉睫。長(zhǎng)期的生產(chǎn)實(shí)踐及大量研究表明，多種芽孢桿菌對(duì)動(dòng)物正常生理狀態(tài)的維持和生長(zhǎng)繁殖都有重要意義。芽孢桿菌不僅有抑制常見病原菌生長(zhǎng)的能力，還能產(chǎn)生多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，是益生菌菌種開發(fā)的重要來源。
　　 近二十年對(duì)活菌制劑的研究有了很大的發(fā)展。但由于活菌制劑在加工、使用、保存、運(yùn)輸過程中容易失活，從而使生物活性降低，而且有些菌株在通過胃內(nèi)低pH環(huán)境時(shí)

2、，不能有效地抵抗鹽酸、膽鹽等作用，不能到達(dá)腸道而發(fā)揮作用，所以開發(fā)一些能夠耐高溫、低pH、膽酸鹽，具有較好粘附性能的菌株成為當(dāng)務(wù)之急。
　　 理想的益生菌菌株最好來自同種動(dòng)物的腸道，本研究正是基于這一理論基礎(chǔ)，以健康仔雞腸道為菌源，對(duì)附著其上的有益菌進(jìn)行分離鑒定，就所獲得的菌株的安全性、抑菌性、耐受等特性進(jìn)行研究，同時(shí)還就優(yōu)化的菌株進(jìn)行了初步應(yīng)用。
　　 本研究成功地從人工飼養(yǎng)的健康仔雞的大腸中分離出1株對(duì)大腸桿菌(E.

3、coli)有較強(qiáng)拮抗作用的芽孢桿菌菌株Y-1，對(duì)該菌株進(jìn)行了菌落形態(tài)、培養(yǎng)特征觀察和生理生化特性鑒定及16S rDNA序列的分析。其中與11個(gè)芽孢桿菌屬的菌株的16S rDNA序列的同源性為94.63 ％～99.35 ％，Y-1被鑒定為側(cè)孢短芽孢桿菌（Brevibacillus laterosporus）。并且模擬體內(nèi)高膽鹽環(huán)境(膽鹽含量0.3％)，檢測(cè)菌株的耐受能力；測(cè)定在人工胃液、腸液環(huán)境中作用不同時(shí)間后的存活菌數(shù)。試驗(yàn)結(jié)果表明，Y

4、-1在膽酸鹽、人工胃液、人工腸液中表現(xiàn)出了很強(qiáng)的耐受能力。
　　 為了提高Brevibacillus laterosporus Y-1菌株發(fā)酵產(chǎn)量，對(duì)Brevibacillus laterosporus Y-1菌株發(fā)酵培養(yǎng)基所需的碳源、氮源、無機(jī)鹽進(jìn)行了篩選，并采用正交試驗(yàn)法，對(duì)培養(yǎng)基的組成以及發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化，最終確定搖瓶最適發(fā)酵培養(yǎng)基為：葡萄糖20 g·L-1，胰蛋白胨5 g·L-1，KH2PO4 2 g·L-1，CaCl

5、2 0.25 g·L-1，MgSO4 0.5 g·L-1。最適發(fā)酵條件為：培養(yǎng)基初始pH7.2，接種量8％，于35℃，180 r/min搖床振蕩培養(yǎng)16h。經(jīng)過發(fā)酵優(yōu)化OD值增加到1.1。
　　 本試驗(yàn)探討芽抱桿菌作為益生菌類飼料添加劑對(duì)1～28日齡艾維因肉仔雞的生產(chǎn)性能、腸道微生態(tài)平衡的影響，以及芽抱桿菌在肉仔雞1～28日齡時(shí)對(duì)大腸桿菌的控制效應(yīng)。在探討益生菌在動(dòng)物飼料中應(yīng)用的同時(shí)，探討其作用機(jī)理，為益生素在生產(chǎn)上的應(yīng)用提供理

6、論支持。
　　 成功分離出雞源的益生菌種，不但能夠解決禽用益生菌的來源與應(yīng)用對(duì)象一致性問題，而且只有這樣才能增強(qiáng)益生菌功效的特異性和針對(duì)性，同時(shí)提高益生菌產(chǎn)品的質(zhì)量和安全性，更有利于益生菌在養(yǎng)殖業(yè)及畜禽疾病防治中的廣泛應(yīng)用。
　　 對(duì)動(dòng)物微生態(tài)制劑而言，在注重效果的同時(shí)還要考慮經(jīng)濟(jì)價(jià)值等問題。本實(shí)驗(yàn)通過鮮菌飼喂效果的積極嘗試，希望能轉(zhuǎn)變成一項(xiàng)簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、實(shí)用、易于推廣的應(yīng)用技術(shù)，更好地應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐中，益生菌的聯(lián)合應(yīng)用為