丙酮酸高產(chǎn)菌株的選育及其發(fā)酵條件研究.pdf

1、河南大學(xué)碩士學(xué)位論文丙酮酸高產(chǎn)菌株的選育及其發(fā)酵條件研究姓名：張彭湃申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：遺傳學(xué)指導(dǎo)教師：楊生玉20070501河南大學(xué)2007屆碩士研究生學(xué)位論文中文接要丙酮酸是一種用途十分廣泛的有機(jī)酸，用傳統(tǒng)的化學(xué)合成法進(jìn)行生產(chǎn)，成本高、工藝復(fù)雜、污染嚴(yán)重，而發(fā)酵法生產(chǎn)則成本低、工藝簡單，基本沒有污染，更加有利于工業(yè)生產(chǎn)。該文對丙酮酸發(fā)酵菌種進(jìn)行篩選并對其搖瓶發(fā)酵工藝進(jìn)行了研究。作者以Torult”psisglabrataTKl0

2、1為出發(fā)菌株，采用誘變育種、代謝工程育種等方法，篩選到的突變株rglabrataTK418，是鹽酸硫胺素、煙酸、鹽酸吡多醇，生物素等四種維生素的滲漏缺陷型，具有盧氟代丙酮酸，口脫氧葡萄糖抗性，具有較低的乙醇脫氫酶活性。采用TTCCaC03復(fù)合平板法篩選出產(chǎn)酸多、ADH酶活力弱、發(fā)酵副產(chǎn)物少的目的菌株；用正交實(shí)驗(yàn)法確定了搖瓶發(fā)酵條件，即以葡萄塘為碳源，濃度1069／L；硫酸銨為唯一氮源，濃度Sg／L；碳氮比25：1、發(fā)酵時(shí)間40hr、殘耱

3、濃度O809，L、丙酮酸產(chǎn)量為58209，L較出發(fā)菌株提高了3560％，生產(chǎn)強(qiáng)度1469／(Lh)，轉(zhuǎn)化率5543％。采用BoxBehnken中心組合設(shè)計(jì)和響應(yīng)面分析法，并結(jié)合SAS統(tǒng)計(jì)軟件，確定了最優(yōu)的維生素濃度組合：鹽酸硫胺素00125mg／L、煙酸97me幾、生物素0022mg／L、鹽酸砒哆酵054mg／Lr并確證鹽酸硫胺素是最重要的影響因素，實(shí)驗(yàn)還設(shè)計(jì)出一種快速篩選丙酮酸離產(chǎn)菌株的篩選方法，在短期內(nèi)完成大量菌株的篩選工作，大大減